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1、枯草芽孢杆菌B.SUBT12酶学性质浅析摘要：考察了分离得到的一株产中性蛋白酶枯草芽孢杆菌B.SUBT12最适作用温度、pH值以及温度、pH值、金属离子和表面活性剂对酶稳定性的影响。试验研究表明：该酶最适作用温度为55℃，最适作用pH为7.5，酶在55℃反应45min仍有50的酶活力，热稳定性较好。金属Ca2和表面活性剂Tl稀释粗酶液于55℃恒温水浴10min、20min、30min、40min、50min、60min,然后测定其残存酶活力,以时间为横坐标,相对酶活力为纵坐标作图。1.2.7pH对酶热稳定性影响用pH7.5的缓冲液定容1ml粗酶液至100ml,分别取20ml稀释酶
2、液于40℃、50℃、60℃、70℃保温30min,测残余酶活。以温度为横坐标,相对酶活力为纵坐标作图。1.2.8金属离子对酶稳定性的影响在稀释酶液中加入0.1mol/L的不同金属离子,保温30min,测定蛋白酶活力,以金属离子作横坐标,蛋白酶活力作纵坐标作图。1.2.9表面活性剂对酶稳定性的影响在稀释粗酶液中加入不同体积的表面活性剂Tl),于40℃保温30min,然后测定其蛋白酶活力。以Tin、20min、30min、40min、50min、60min、70min后,按Folin-酚[9]法测定蛋白酶活力,结果如图3。从图3可以看出,酶的热稳定性较好。在55℃保温45min仍保持
3、有近50活力,当保温时间延长至60min或更长时,酶因热变性活力急剧下降甚至没有了活力。2.5pH对酶热稳定性的影响将12全文查看1ml酶液用pH7.5缓冲液稀释到100ml并于55℃分别保温40min、50min、60min、70min,然后测定其蛋白酶活力,结果如图4。从图4可以看出,pH对酶有一定的保护作用。在此体系中反应,酶保温60min仍有近50的活力,保温时间继续延长到70min时,酶因热变性酶活急剧降低。如果继续加长酶液的保温时间,酶会因为热变性完全失活。2.6金属离子对酶稳定性的影响在稀释粗酶液中加入0.1mol/L不同的金属离子40℃保温30min,然后按Fol
4、in-酚法测定蛋白酶活力,结果如图5。从图5可以看出,Ca2对酶有一定的激活作用和稳定作用,但激活作用不明显,这与许多相关报道相同[11-13]。Fe3对酶有强烈的抑制作用,作用机理有待于更一步深究。2.7表面活性剂对酶稳定性的影响向稀释粗酶液中加入不同体积的Tin,测定其蛋白酶活力。试验结果表明,表面活性剂对酶有不同程度的激活作用(图略)。当添加量为5ml时,酶活达1286.36U/ml,比空白提高了近12.09。可能作用机理为：表面活性剂亲水亲油基团有利于增强细胞膜的通透性,微生物蛋白水解酶均为胞外酶,膜通透性的增强有利于酶从膜内往外运输,也有可能是由于细胞膜通透性的改变打破
5、细胞内酶合成的平衡机制,因此提高了发酵液中蛋白酶的产量。3结论与讨论B.SUBT12经初步鉴定为枯草芽孢杆菌，酶学性质研究表明最适作用温度为55℃，最适作用pH值为7.5，酶的热稳定性较好，pH对酶有一定的保护作用，在pH7.5的反应体系中，酶在55℃保温60min时，酶有50的活力，时间延长至70min时，酶仍有30的活力，缓冲液对酶的“保护”作用可能是由于缓冲液有利于酶三级结构的稳定，因此，温度对其作用效力得到缓和。金属离子对酶有一定的激活作用，但激活作用不太明显，可能是由于“金属桥”的形成有利于酶与底物的结合。表面活性剂对产酶也有激活作用，添加5mlTperature,pH
6、andNaClonproteaseactivityindigestivetractofyoungturbot,Scophthalmusmaximus[J].ChineseJournalofOceanologyandLimnology,2006,3:88~94[6]FedericoJ.arianoGrasselli,OsvaldoCascone.Rapidneutralproteasepurificationbydye-affinitymembranechromatography[J]ProcessBiochemistry,2006,1:356-361[7]ChandranSand
7、hya,AlagarsamySumantha,GeorgeSzakacs.parativeevaluationofneutralproteaseproductionbyAspergillusoryzaeinsubmergedandsolid-statefermentation[J]ProcessBiochemistry,2005,8:2689-26948赫林食品微生物实验技术[M]北京中国农业出版社20019肖怀秋林亲录李玉珍赵谋明产中性蛋白酶菌株B4发酵条件的研究[J]食品与机
