高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量论文

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1、高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量论文【摘要】目的建立高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素含量的方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为DiamonsiltmC18柱；流动相：甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钾水溶液（50∶50）；流速：1.0ml/min；检测波长：290nm。结果鬼臼毒素在0.04769～0.4769mg/ml呈良好线性关系（r=0.9996），平均回收率为99.94%，RSD=1.71%（n=5）。结论采用高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量，操作简便、准确，专属性强。【关键词】高效液相色谱八角莲鬼臼毒素Ab

2、stract：ObjectiveToestablishamethodofdeterminingPodophllotoxininDysosmaversipellisbyHPLC.MethodsHighPerformanceLiquidChromatographyedDiamonsilC18.Thechromatographyconditionsethanol-0.1mol/Lmonobasicpotassiumphosphate(50∶50)asmobilephase,.freell/minanddetecting.ResultsAgo

3、odlinearityofPodophllotoxing/ml(r=0.9996),theaveragerecoveryethodcansupplyevidenceforthequalityevaluationofDysosmaversipellis.Itissimpleandaccurate.Keyaversipellis；Podophllotoxin八角莲为小檗科植物八角莲Dysosmaversipellis（Hance.）M.cheng（PodophyllumversipelleHance.）的根及根茎。具有清热解毒、化痰散结、

4、祛痰消肿之功能。用于痈肿疔疮、瘰疬、咽喉肿痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等。笔者曾对八角莲的性状、显微结构进行过研究［1］。本实验采用高效液相色谱法测定八角莲中鬼臼毒素的含量，为完善八角莲药材的质量标准及临床应用提供科学依据。1仪器与试药1.1仪器戴安UltiMateTM3000型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵、自动进样器、柱温箱、紫外检测器、变色龙（chromeleon）软件数据处理系统；岛津AU.Cheng（PodophyllumversipelleHance.），由中南民族大学万定荣教授鉴定和提供。2方法与结果2.1色谱条件Diamon

5、siltmC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-0.1mol/L磷酸二氢钾（50∶50）；检测波长290nm；流速1.0ml/min；柱温30℃；灵敏度：0.1AUFS；理论塔板数按鬼臼毒素峰计算不低于1500。2.2对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥12h的鬼臼毒素对照品适量，加甲醇制成每毫升约含0.5mg的溶液，摇匀，微孔滤膜过滤（0.45μm），得鬼臼毒素对照品溶液。2.3供试品溶液的制备分别取八角莲根茎和根粉末（过3号筛）各约0.5g，精密称取，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密

6、塞，放置12h，称定重量，超声处理30min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，微孔滤膜过滤（0.45μm），得八角莲根茎和根的供试品溶液。2.4八角莲根茎和根HPLC谱图比较分别取八角莲根茎和根供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪中，对其HPLC图进行比较，由图1～4比较可以看出，八角莲根中基本不含鬼臼毒素成分。图1八角莲根茎HPLC图（略）图2八角莲根HPLC图（略）图3鬼臼毒素对照品HPLC图（略）图4空白溶剂HPLC图（略）2.5线性关系考察精密称取在五氧化二磷干燥器中减压干燥12h的鬼臼毒

7、素对照品25.5mg，置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀（0.51×93.5%＝0.4769mg/ml），精密量取溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml，分别置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐标，鬼臼毒素含量为横坐标，绘制标准曲线，统计学计算回归方程为：Y=0.01108X＋8.6782×10－3，r=0.9996。结果表明，鬼臼毒素的进样量在0.04769～0.4769mg/ml的范围内，浓度与峰面积呈良好线性关系。2.6精密度实验精密吸取鬼臼毒素对照品溶液10

8、μl，按上述色谱条件，连续进样5次，依次测定各峰的峰面积值，结果鬼臼毒素对照品RSD=0.24%，表明仪器精密度良好。2.7稳定性实验精密吸取密封室温保存的八角莲根茎供试品溶液10μl，分别于0，2，5，8，10h进样，