川芎嗪对严重烧伤大鼠心肌细胞grp94表达的影响论文

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1、川芎嗪对严重烧伤大鼠心肌细胞GRP94表达的影响论文.freelRNA和蛋白表达于烧伤后3h显著性升高，12h达峰值，24h还显著升高;Caspase-3活性在伤后3h升高，12h达高峰，48h后仍显著高于对照组。川芎嗪治疗组GRP94的表达和Caspase-3活性较烧伤组均有显著性降低(P0.05)。结论严重烧伤可引起心肌细胞内GRP94表达呈持续性升高，川芎嗪对烧伤后早期GRP94表达升高有较好的拮抗作用。【关键词】烧伤;川芎嗪;葡萄糖调节蛋白;心肌损伤;内质网应激Abstract：ObjectiveToobservetheeffectsofliqustazineonexpressi

2、onchangeofglucose-regulatedprotein94(GRP94)inthecardiomyocytesofsevereburnrats.MethodsHealthyadultP)对其的影响。1材料和方法1.1动物分组及烧伤模型制作5选健康成年IAS-8型图像分析系统检测心肌细胞GRP94蛋白阳性染色面积和平均吸光度值，二者乘积为积分吸光度。每张切片于阳性表达区选择5个无重叠视野，求出平均积分吸光度值，用积分吸光度大小表达蛋白水平的高低。1.5心肌组织Caspase-3活性测定6取心肌组织0.3g，用冷生理盐水洗2遍，在平皿上剪成碎块，置100目及200目尼龙网上，用

3、眼科镊子夹持摩擦，以冷PBS液冲冼，收集细胞放入10ml离心管中，2000g离心5min，去上清。加PBS洗2次，加入细胞裂解液0.5ml，充分振荡后，室温下作用30min，15000g离心15min;取上清100μl转入到另一Eppendrof管中，加HEPES缓冲液1ml，再加入AC-DEVD-AMC10μl(1μg/μl)，37℃水浴60min。于激发波长为385nm，发射波长为465nm处测定样品孵育前后荧光强度变化(△FA/h)。蛋白定量采用Lool·h-1mg蛋白表示。1.6统计学处理所有实验结果数据均用±s表示，采用SPSS11.5统计软件对实验数据进行处理，两组间均数比较

4、采用t检验，P0.05为差异有显著性意义。2结果2.1血浆cTnT和TNF-α含量变化用酶联免疫法和放射免疫法分别观测了大鼠血浆中cTnT和TNF-α含量(见表1)。由表1可见，大鼠30%TBSAⅢ度烫伤后3h血浆中cTnT含量即呈显著升高(P0.01)，12h达峰值，24h仍显著高于对照组(P0.01)，表明烫伤后有明显的大鼠心肌细胞损伤。血浆TNF-α水平在烫伤后1h开始呈显著升高，12h达峰值，24h仍高于对照组(P0.05)。与烧伤组比较川芎嗪治疗组各时相点血浆中cTnT、TNF-α水平均有显著性降低。表1大鼠血浆cTnT、TNF-α含量2.2心肌细胞GRP94mRNA表达变化结

5、果显示，在362bp位置不仅有GRP94的RT-PCR扩增片段(见图1～2)出现，而且烧伤组心肌细胞GRP94mRNA表达明显高于对照组;由图2(表2)可见，烧伤组大鼠心肌中GRP94mRNA表达于烧伤后3h显著性升高，伤后12h达峰值，伤后24h还呈显著升高;川芎嗪治疗组GRP94mRNA的表达量较烧伤组有显著性降低。2.3心肌细胞GRP94蛋白表达大鼠烧伤后3h心肌中GRP94蛋白即开始升高，伤后12h达峰值，24h仍然高于正常对照组。川芎嗪治疗组大鼠心肌中各时相点的GRP94蛋白蛋白水平较烧伤组均有显著性降低(P0.01);与烧伤组比较，在伤后12h，川芎嗪治疗组GRP94蛋白水平

6、下降了51.02%，说明川芎嗪对烧伤后大鼠心肌GRP94蛋白表达升高有较好的拮抗作用。见图3。2.4大鼠烧伤后心肌细胞中Caspase-3活性变化从表3结果可见，大鼠心肌中Caspase-3活性在烧伤后3h开始升高，伤后12h达高峰，24h后仍显著高于对照组(0.35±0.06);川芎嗪治疗组烧伤后心肌Caspase-3活性较烧伤组均有显著性降低(P0.05)。M为DNAmarker1-正常对照组2-烧伤组3-川芎嗪治疗组图1烧伤后12h心肌组织GRP94RT-PCR结果M为DNAmarker1.正常对照2.伤后1h3.伤后3h4.伤后6h5.伤后12h6.伤后24h图2烧伤后各时相点心

7、肌组织GRP94RT-PCR结果表2大鼠心肌细胞中GRP94mRNA表达变化图3大鼠心肌细胞GRP94蛋白表达变化表3各组大鼠心肌细胞中Caspase-3活性3讨论内质网应激是细胞应激中的最初反应7，8，也是线粒体应激、核应激的最初共同通路。国内外研究9证实，严重烧伤早期存在心肌器质性损害，且早期心肌损伤也是造成心功能障碍的重要原因之一。本研究采用大鼠30%TBSAⅢ度烫伤(经病理切片证实)动物模型，观察严重烧伤后心肌细胞内质网应激