10-液相色谱串联质谱联用技术-实验指导(许煊炜)

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1、液相色谱串联质谱联用仪检测技术实验指导（2014、2015级）课程内容（一个实验8学时）：（1）ABSciexQtrap4500三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用。（2）利用液相色谱串联质谱联用仪快速测定水果中7种农药的残留量。吉林农业大学农业部参茸质检中心2017.03实验一ABSciexQtrap4500三重四级杆/离子阱液相色谱串联质谱联用仪的结构原理、操作及定性定量应用一.实验目的和意义通过学习液质联用仪的构成和使用方法，及其在定性、定量分析中的应用，培养学生使用液质联用仪进行仪器分析的能力，并培养学生严

2、谨的科学态度、细致的工作作风、实事求是的数据报告和良好的实验习惯（准备充分、操作规范，记录简明，台面整洁、实验有序，良好的环保和公德意识）。培养培养学生的动手能力、理论联系实际的能力、统筹思维能力、创新能力、独立分析解决实际问题的能力、查阅手册资料并运用其数据资料的能力以及归纳总结的能力等。（一）检测仪器1、仪器名称高效液相色谱串联质谱联用仪（简称LC-MS-MS）。型号：4500QTRAP（美国AppliedBiosystems公司）。2、仪器组成液相色谱部分：岛津LC-30A，配有在线脱气机、超高压二元泵、自动进样器；串联质谱部分：QTRAP4

3、500，配有ESI离子源、串联四级杆/线性离子阱。3、主要性能指标离子化方式：ESI电离质量范围：（5~1700）amu分辨率：>6900质量稳定性：0.1amu/12h灵敏度：1pgreserpine,ESI+,MRM扫描（m/z:609/195），信噪比S/N>120:1扫描速度：4000amu/sec质量准确度：<0.01%（全质量数范围）4、方法原理高效液相色谱二元泵将流动相泵人系统并混合，自动进样器将待测样品注入流动相中，随流动相进入色谱柱，由于样品不同组分在色谱柱中保留时间不同，各组分被分开，依次进入离子源。在离子源中，各组分以ESI或

4、APCI方式电离，被加速后进入质量分析器。4500QTRAP的质量分析器主要由Q1、Q2、Q3三组四级杆串联组成。Q1可将分子离子按质荷比（m/z）大小分开；Q2是碰撞室，可将母离子进一步破碎为碎片离子；Q3具有四级杆和线性离子阱两种功能，作为四级杆时可将分子离子或碎片离子按质荷比大小分开，作为离子阱还可富集离子从而提高检测灵敏度。各组分的不同离子在质量分析器中被破碎、分离，并按质荷比大小依次抵达监测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质谱图。4500QTRAP通过串联四级杆/线性离子阱两种不同质谱技术的结合，可以在单次分析中对复杂样本中的单个成

5、分同时进行定性和定量，也可以对多个化合物进行定量分析。整台仪器的控制、数据采集、数据处理、结果输出均由PC计算机Windows操作系统支持下的Analyst软件控制完成。（二）样品1、样品要求本仪器适合分子量在5~1700amu范围内的有机样品的定性及定量分析。待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。若样品或配制的样品溶液发生沉淀、挥发、变质等异常现象时，应重新取样或重新配制溶液。2、试剂要求所有的试剂均选用色谱纯级，所用水的电导率应大于18KΩ。流动相必须用0.2µm或0.45µm滤膜过滤后方可使用。3、分离条件要求在液相色谱仪上确定分离条件，使

6、待测组分能完全分离，且该色谱条件中流动相不应含有不挥发性盐，如磷酸盐。（三）、操作步骤实施检测操作的人员，必须熟悉该仪器的操作规程，仪器的工作状态、包括检测灵敏度和分辨率，必须满足检测项目的要求。1、开机前准备开机前应检查仪器室内电、气的供应情况及空调机的工作状态是否稳定，检查真空机械泵泵油是否需要更换。只有当UPS工作正常，Gas1/Gas2、CurtainGas和ExhaustGas的压力分别稳定在0.35、0.35和0.7Mpa，环境温度为10~30℃，相对湿度小于70%时才能开机。2、开机1)打开真空机械泵上的电源开关。2)真空机械泵继续工

7、作至少15分钟后，打开MS电源主开关。3)等真空度达到2×10-5Torr（绿色指示灯不闪）后，打开PC计算机电源3、仪器调谐（四）、方法建立1.在Analyst软件Tools菜单中选择Project→CreateProject。在Projectname项下输入新建的Project名称。注意，不要点选窗口中的其他按钮！点击OK，确认新建Project。2.在Analyst软件界面下，双击导航栏内HardwareConfiguration。在弹出窗口中选择MassOnly，点击ActivateProfile，激活MassOnly（只联接质谱主机）。3

8、.在导航栏内单击TuneandCalibrate，进入调谐模式。点击上方工具条中的T钮。此时，应注意到主机有“扑”声音，表