草酸促进人参愈伤组织细胞生长和人参多糖与皂苷积累的研究论文

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1、草酸促进人参愈伤组织细胞生长和人参多糖与皂苷积累的研究论文田鹏玮，刘同祥，杨芳，孙颖，张宗申【摘要】目的研究草酸在光照和不同温度条件下对人参愈伤组织细胞生长及次生代谢物质积累的影响。方法利用人参悬浮细胞培养体系,通过改变培养条件和在培养基中添加草酸,通过一定时间的培养后检测细胞增长和次生代谢成分的积累。结果光照和培养温度对草酸的诱导效果有很大影响，其中在12h/d的光照下，0.01～1mmol·L-1的草酸对细胞生长和皂苷积累都有促进作用，而10mmol·L-1的草酸对多糖积累有促进作用;在4个温度(2

2、2.freelentonboththegroetaboliteaccumulationofGinsengcalluscells.MethodsExaminethecellgroulationofsecondarymetabolitesofsuspensionGinsengcellsaftermodulationofcultureconditionsandadditionofoxalateintothemedium.ResultsBothculturetemperatureandluminationbra

3、ughtaboutmanifesteffectontheinductionofcellgroetaboliteaccumulationbyoxalate.Ina12hcycleoflight/darkness,theoxalateattheconcentrationrangeof0.01to1mmol·L-1improvedthecellgroulation,homol·L-1oxalatecouldexhibiteffectiveinductiononpolysaccharideaccumulatio

4、n.Inthefourlevelsofculturetemperature(22,24,26and28℃),additionofoxalatecouldincreaseitsinhibitiononthecellgroperature,houlationofbothpolysaccharidesandsaponin.ConclusionAdoptionofproperluminationperiodandculturetemperatureulationofsecondarymetaboliesaccu

5、mulationandcellgrog/L,比对照提高约6倍2。Ketchum等3发现加入茉莉酮酸甲酯,.freel)进行过滤灭菌。取一定量的草酸溶液加入到培养基中使其终浓度为0.01，0.1，1，10mmol·L-1，分别在22，24，26，28℃和24，26℃下光照12h/d培养到28d收获细胞，然后测定其干重、人参多糖和人参皂苷的含量。2.2细胞干重的测定收集愈伤组织在60℃恒温箱中干燥至恒重,精确称重、保存。2.3人参多糖的测定2.3.1提取6将愈伤组织在50℃下烘干至恒重，粉碎，准确称取1.5

6、00g，用滤纸包好置索氏提取器中加入适量70%的乙醇提取3h。滤纸包挥干乙醇，放于小烧杯中加入20倍量的去离子水超声波提取110min。水提液浓缩定容于25ml的容量瓶中备用。2.3.2含量测定采用蒽酮比色法7的方法测定人参多糖。2.4人参皂苷总量的测定人参中人参总皂苷含量的测定采用国家标准的方法-GB/T15517.1-1995。对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Re标准品10mg，加甲醇5ml，振荡，摇匀，待用。精密称取对照品溶液与样品溶液各50μl，分别置具塞刻度试管中，蒸干后，加入8%香草醛乙醇

7、试剂液0.5ml(8%香草醛乙醇试剂液：取香草醛0.8g，加无水乙醇使溶解成10ml，摇匀，即得)，体积分数72%硫酸试剂液5ml，充分摇匀，混匀后置60℃恒温水浴锅上加热10min，立即用冷水冷却10min，摇匀，以试剂作空白，于544nm波长下分别测定吸收度8。3结果3.1草酸在不同温度下对细胞生长及代谢物生成的影响见图1。由图1-a对照组可知随着温度的上升细胞生长受到了抑制，0.1和1mmol·L-1组在各个温度下均高于对照组，1mmol·L-1组在26℃时显著促进了细胞生长，而10mmol·L-

8、1草酸抑制细胞的生长。从图1-b对照组可以看出温度对多糖含量影响不大，在各个温度下均有高于对照组，其中在28℃草酸浓度0.01mmol·L-1时取得最高值24.33mg·g-1。从图1-c对照组可以看出温度升高皂苷含量略有升高，在22℃时0.1，1mmol·L-1组高于对照组，24℃时0.01mmol·L-1高于对照组，26℃时0.01，0.1高于对照组，28℃时0.01，1mmol·L-1高于对照组，其中28℃1mmol·L-1组取得最高