肉苁蓉对败血症大鼠肝线粒体能量代谢功能的影响

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1、肉苁蓉对败血症大鼠肝线粒体能量代谢功能的影响【摘要】目的研究肉苁蓉(CistanchedeserticolaY.C.Ma)对败血症大鼠肝线粒体功能的影响，明确其具体作用机制。方法采用盲肠结扎穿孔术(CLP)复制败血症模型，采用生理多导仪监测平均动脉压(MAP)的变化，定磷法测定肝线粒体ATP酶活性，采用Clark氧电极法测定呼吸控制率(RCR)，Ⅲ态的变化。结果大鼠在CLP术后，线粒体ATP酶活性，RCR和Ⅲ态显著降低(P<0.01)。肉苁蓉给药组肝线粒体ATP酶活性，RCR和Ⅲ态较对照组明显改善(P<0.05)，与大鼠死亡率的降低呈显著正相关。结论肉苁蓉能增强实

2、验性败血症大鼠线粒体能量代谢功能。【关键词】肉苁蓉败血症线粒体ATP酶呼吸控制率　　Abstract：ObjectiveTostudytheeffectofCistanchedeserticolaY.C.Maonenergymetabolicfunctionoflivermitochondriafolloentmechanism.MethodsThemodelofsepsisadebycecalligationandpuncture.CistanchedeserticolaY.C.Maandsalineinistratedbygastricgaragetotheratsres

3、pectivelyforfifteendays.LivermitochondriaRCR，ATPaseactivityitochondriaRCR，ATPaseactivityoretheeffectprovementofthedeathrate.ConclusionCistanchedeserticolaY.C.Macanstrengthentheenergymetabolicfunctionoflivermitochondrial，effectivelyattenuatethedysfunctionofhepatocyticmitochondriafromthedamag

4、einducedbysepsis.　　Keyl。戊巴比妥钠(001104)，中国医药集团上海化学试剂公司；ATP酶试剂(20030108)南京建成生物工程研究所。JYDIA溶氧测定仪，江苏电分析仪器厂。　　1.2分组　　　雄性SD大鼠(200～250g)40只(购自华中科技大学同济医学院实验动物中心)，随机分为5组：假手术组(n=8)；12h对照组(n=8)；12h给药组(n=8)；16h对照组(n＝8)；16h给药组(n=8)。假手术组和对照组给予生理盐水灌胃，给药组予1g/ml的肉苁蓉(200mg/kg)灌胃，2次/d，喂至15d。采用盲肠结扎穿孔术［4］复制感染性休克

5、模型。手术前动物自由饮水，禁食12h。　　1.3平均动脉压的测定　　颈静脉插入头皮针，肝素抗凝，左侧颈总动脉插管至主动脉弓处，用自制导管与生理多导仪相连，记录平均动脉压(MAP)，待MAP平稳后进行实验。　　1.4线粒体ATP酶活性测定　　　取大鼠肝脏6g迅速置于0℃分离介质〔蔗糖250mmol，乙羟乙基哌嗪2－乙基磺酸2mmol，乙二胺四乙酸0.1mmol，pH7.4〕，剖开洗去杂质，以分离介质悬浮(1∶10)，用Teflon电动匀浆器匀浆(1200r/min)，以2000r/min离心10min，留置上清液，以10000r/min离心15min，弃去上清液，取沉淀物以2m

6、l分离介质进行悬浮得到线粒体悬液，全部过程在0～4℃进行。采用定磷法［5］测ATP酶活性。　　1.5线粒体呼吸功能的测定　　采用Clark氧电极法［6］，取反应介质(0.225mol/L蔗糖，15mmol/LKCl，15mmol/LKH2PO4，50mmol/LTrisHCl，1mmol/LEDTA，pH7.5)2.9ml，加入搅拌反应杯中，恒温30℃，加入线粒体悬液0.1ml，以琥珀酸(终浓度10mmol/L)为底物，反应1min后，加入600nmol/LADP，用JYD－IA溶氧测定仪记录线粒体氧化还原反应曲线，计算Ⅲ态，Ⅳ态，RCR。　　2结果　　2.1肉苁蓉对败血症大

7、鼠平均动脉压和24h大鼠死亡率的影响　　　盲肠结扎穿孔术后对照组血压12h血压显著降低，16h更趋明显，与假手术组比较，有显著差异。肉苁蓉治疗组血压得到改善。对照组死亡率与假手术组相比较，死亡率显著上升，给药组死亡率较对照组明显降低。结果见表1。表1肉苁蓉对大鼠平均动脉压和死亡率的影响(略)　　2.2肉苁蓉对败血症大鼠线粒体呼吸功能的影响　　　对照组呼吸Ⅲ态速率，明显低于假手术组(P<0.01)，Ⅳ态呼吸速率较假手术组变化不是太大，而致对照组RCR显著低于假手术组(P<0.01)，给药组RC