acd保养液中树突状细胞的变化

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1、ACD保养液中树突状细胞的变化作者：姚仁南，陈复兴，李玺，王振德，刘军权，张赞，赵勤，孙飞【摘要】目的检测人树突状细胞（DC）在ACD保养液中不同时间的增殖和吞噬能力，为减少非溶血性输血反应提供实验依据。方法抽取8例健康自愿献血者外周静脉血200ml，ACD-B抗凝，4℃保存，在第1、2、3、4天分别取血20ml，分离单个核细胞（PBMC），孵育2h洗涤后，贴壁细胞加入细胞因子联合诱导培养DC。灭活的酵母菌与DC以100∶1比例加入后37℃孵育1h，取细胞悬液涂片，瑞-姬染色。光镜下计数吞噬酵母菌的DC，计算出DC的吞噬率和吞噬指数。结果正常人外周静脉血第1天培养诱导的DC增殖

2、生长良好，第2天仅有少量DC生长，第3、4天则无DC生长。第1天培养诱导的DC对酵母菌的吞噬率为78%～85%，平均值81%，吞噬指数为254。结论在ACD保养液中的健康人的DC仅在离体后1～2天内能诱导增殖，诱导增殖后的DC具有较强的吞噬功能。DC活性可能与某些非溶血性输血反应有关。【关键词】树突状细胞；ACD保养液；吞噬功能　　Abstract：ObjectiveToprovideexperimentalbasisforclinicalreductionofnon-hemolytictransfusionreactionsbydetectionsoftheprolifera

3、tionandthephagocyticcapacityofhumandendriticcells(DC)inACDpreservationsolutionatdifferenttimepoints.Methods200mlofperipheralvEinblood8healthyvoluntarydonorsandlbloodononuclearcells(PBMC).Havingbeenincubatedfor2hoursandrinsed,theadherentcellsentedsastainingofthecellsuspensionsmeared.Thenumber

4、ofDCsthatphagocytosedyeasticroscopeandthephagocyticrateandphagocyticindexofDCsaldonorsofDay1hadgoodproliferationofDCsandthebloodofDay2hadonlyalittlegroanscanonlybeinducedtoproliferateayberelatedtocertainnon-hemolytictransfusionreaction.　　Keyega公司产品，rhGM-CSF由中国军事医学科学院提供，RPMI1640、胎牛血清为Gibico公司

5、产品；淋巴细胞分离液（Ficoll，1.077）由上海第二制药厂提供，PE结合的鼠抗人单抗CDla、CD80及同亚型对照抗体兔鼠IgG1К为Pharmingen公司产品，FITC结合的CD14、CD86、HLA-DR和同型对照抗体FITC-mIgG1、PE-mIgG2a为BD公司提供，流式细胞仪为美国BD公司的FACSCaliar，分析软件为ELITE。　　1.2酵母菌悬液的制备取鲜酵母（安琪酵母）1g，生理盐水配成10%酵母菌悬液，1000r/min离心5min，洗涤3次，取上层液10ml，沸水浴中30min，取出后3000r/min离心5min，去除上清液后用生理盐水恢复同

6、体积，1000r/min离心5min，取上层液备用。　　1.3DC的体外培养参考　　图2培养7天后的树突状细胞（瑞-姬染色，×2000）（略）　　2.3DC与酵母菌混合孵育后形态观察DC与灭活酵母菌混合孵育1h后经瑞-姬染色光镜下观察细胞形态，绝大多数DC胞质内吞噬有多个酵母菌，数量从几个到十几个不等，以吞噬1～5个酵母菌为主。其形态以一个DC为中心，多个酵母菌被DC吞噬或围绕其周围，形成一种“卫星”现象。DC被染成蓝色，形态不规则。在突起的胞质中吞噬有数量不等的酵母菌，有的则围绕于细胞周围，胞核大多偏于一侧，酵母菌被染成紫红色（图3）。　　图3培养7天后的DC吞噬酵母菌情况（

7、瑞-姬染色，×1000）（略）　　2.4吞噬率和吞噬指数计算DC吞噬率：将DC与酵母菌混合孵育后涂片染色，用光镜计数200个DC，计算出吞噬酵母菌的DC，换成百分率为DC吞噬率。吞噬指数：计算100个DC吞噬酵母菌的数量为DC吞噬指数。见表1。　　表1培养7天后DC的吞噬率和吞噬指数（略）　　3讨论　　DC是机体免疫反应的始动者，通过分泌各种因子参与固有和适应性免疫应答［3］。有研究表明可以通过调节DC的功能，如选择性激活或抑制DC的功能来调节免疫应答，对肿瘤、移植排斥反应、自身免疫性疾病的