叉头蛋白、p66shc与长寿论文

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1、叉头蛋白、p66shc与长寿论文.freelino-acid分析方法的研究证明，用UV和H2O2处理细胞后磷酸丝氨酸明显而持续地增加，为研究p66shc在应激反应上的作用，Migliaccio等研究了敲除p66shc在细胞对氧化和DNA损伤（UV和γ射线照射）反应上的作用。MEFs细胞是来自有shcCH2定点突变的小鼠，这种突变不影响p52shc和p46shc的编码序列。像期望的那样，p66shc在p66shc+/-细胞是降低的，在p66shc-/-细胞是缺乏的，但在这种细胞中，p52shc和p46shc都是正常的。野生型MEFs对H2O2处理是敏感的，即在

2、处理24h后70%细胞死亡（其中的70%以上是凋亡），超表达p66shc增加野生MEFs的易感性（80%～90%的细胞死亡）。而p66shc的敲除增加MEFs对H2O2的抵抗（30%的细胞死亡）。如用UV处理细胞，在野生型，处理24h和48h以后，分别有80%和40%的细胞仍然生存，在p66shc-/-，UV对细胞未显示出毒性作用。研究还证明，仅野生型p66shc在p66shc-/-细胞中的表达即可恢复细胞对UV和H2O2的正常反应，但p52shc和p46shc的表达没有类似的作用。为检查p66shc-/-在体内抵抗氧化应激的能力，动物用能产生超氧阴离子的百

3、草枯（paraquat）处理，10周大的小鼠用70mg/kg的百草枯腹腔注射，5只野生型小鼠在注射48h内全部死亡，但5只p66shc-/-小鼠在48h内仅死亡2只，另2只在72h后死亡，一只存活了7周。研究还发现p66shc能影响寿命，一个研究使用了36只小鼠，其中野生型14只，8只杂合子（p66shc+/-），14只的p66shc的被敲除（p66shc-/-）。这些小鼠都是p66shc+/-杂合子双亲所生，在同样的条件下饲养。28个月以后，野生型小鼠全部死亡，8只杂合子中的5只死亡，而14只p66shc敲除小鼠仅死亡3只。2p66shc和叉头蛋白的机能联

4、系叉头蛋白转录因子家族成员包括DAF-16和哺乳类的FKHRL1、FKHR和AFX等。它们都有一个高度保守的100个氨基酸的叉头序列，这个序列含有一个有翼螺旋（oto等［6］研究了H2O2处理和FKHRL1磷酸化的关系，他们发现H2O2处理培养的PC12细胞导致浓度依赖的FKHRL1磷酸化的增加。他们还发现可溶性抗氧化剂谷胱甘肽前体-已酰基半胱氨酸和谷胱甘肽都能以浓度依赖的方式降低PC12细胞由H2O2处理诱发的FKHRL1的磷酸化。到目前为止，能增加哺乳类动物寿命的遗传改变是敲除p66shc的纯合子，p66shc能调节细胞内的ROS水平，并因此可以修饰叉头

5、蛋白的活性。研究证明虽然小鼠的野生型（p66shc+/+和p66shc-/-型的成纤维细胞中的H2O2水平都很低，细胞在受到可增加氧化应激的血清撤除刺激以后，同野生型相比，p66shc-/-细胞的H2O2水平更低。P66shc的36位丝氨酸的残基的突变将产生一个显性干扰表型（dominantinterferingphenotype），仅用空载体、野生型p66shc+/+和有36位丝氨酸突变的p66shc分别转染PC12细胞，虽然转染野生型p66shc和有36位丝氨酸突变的p66shc的PC12细胞超表达的p66shc蛋白的量是相似的，但表达有36位丝氨酸突变

6、的p66shc的PC12细胞中的ROS的水平比表达野生型的细胞低，它的量近似于p66shc-/-细胞。对有延长寿命突变的线虫的遗传学研究也证明［7］，适当增加叉头蛋白的活性能延长寿命。研究者发现p66shc-/-细胞中的依赖叉头蛋白的转录活性是增加的，它在导致强烈氧化应激反应的血清撤除时更明显。还有报道证明p66shc显性干扰突变的稳定表达也可增加FKHRL1的活性。为证明氧化还原依赖的叉头蛋白的失活能被p66shc调节，细胞被用外源性H2O2处理，野生型成纤维细胞在H2O2处理以后，FKHRL1的磷酸化快速和有统计学意义的增加，而p66shc-/-细胞在氧

7、化应激处理后FKHRL1的磷酸化无明显改变，在不表达p66shc的细胞，同时p66shc-/-细胞在接受其他应激(如紫外线)刺激以后，FKHRL1的磷酸化也无明显改变。在表达突变的p66shc的PC12细胞也观察到类似的FKHRL1的调节模式。在p66shc-/-成纤维细胞中仅表达野生型p66shc-/-就能恢复氧化应激诱发的FKHRL1磷酸化，这表明氧化应激修饰的插头蛋白磷酸化需要p66shc的参与。在线虫，DAF-16之所以能调节氧化应激，部分是由于它直接或间接反式激活（transactivation）许多抗氧化酶和一些应激基因相关产物。为探讨在哺乳类细

8、胞增加FKHRL1的转录活性是否可提高抗氧化清除和对