p2嘌呤受体激动剂对血管平滑肌bkca通道作用机制的研究

《p2嘌呤受体激动剂对血管平滑肌bkca通道作用机制的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、P2嘌呤受体激动剂对血管平滑肌BKCa通道作用机制的研究作者：潘雪汪晓凯曾晓容杨艳蔡芳李向楠【摘要】目的探讨P2嘌呤受体激动剂对血管平滑肌大电导钙激活钾通道（BKCa)作用机制。方法应用全细胞穿孔膜片钳记录技术，观察UTP对猪冠状动脉平滑肌细胞膜上BKCa介导的自发性瞬时外向钾电流（STOCs）的作用，并比较ATP与UTP对STOCs作用的强弱；以及磷脂酶C（PLC）的特异性阻断剂U73122预处理细胞后，UTP和ATP对STOCs的作用。结果①5～100μmol/L的UTP可浓度依赖性的增加STOCs的幅度与频率，比

2、较50μmol/L的UTP和ATP对STOCs作用，二者无明显差异；②5μmol/L的U73122处理细胞后50μmol/LUTP和ATP无法激活STOCs，〔(22.76±6.43)pA，(0.2227±0.0977)Hzvs(23.28±8.43)pA，(0.1953±0.061)Hz，n=7,P>0.05；(23.21±7.87)pA，(0.243±0.0876)Hzvs(24.38±9.21)pA，(0.2162±0.075)Hz，n=6，P>0.05〕。结论ATP和UTP可通过PLC途径激活猪冠状

3、动脉平滑肌上的STOCs，UTP对其激活作用具有浓度依赖性，二者的激活效应无明显差异。【关键词】大电导钙激活钾通道；自发性瞬时外向钾电流；磷脂酶C；三磷酸腺苷；三磷酸尿苷；穿孔膜片钳技术【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsofP2purinergicreceptoragonistsonlargeconductancecalciumactivatedpotassiumchannelsofvascularsmoothmuscle.MethodsPerforatedpatch

4、configurationofpatchclamptechniqueoothmusclecellsasechanismofUTPandATPeffectsonSTOCsofporcinecoronarysmoothmusclecellsol/L)significantlyincreasedSTOCsamplitudeandfrequencyinadosedependentmanner.TheeffectsofUTPandATPonSTOCshadnodifference.②gCl21.2、CaCl22.4、葡萄糖（G

5、lucose，Glu）12、羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES）10，NaOH将pH调至7.4。无钙台式液(mmol/L)：NaCl127、KCl5.9、MgCl21.2、Glu12、HEPES10，NaOH将pH调至7.4。记录STOCs电极内液(mmol/L):钾天冬氨酸（Kaspartate，KASP）110，KCl30，MgCl21，HEPES10，NaCl10,乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）0.05，pH值用KOH调至7.2左右；两性霉素B（amphotericinB，AmB）在电极液中浓度为200μg/

6、ml。记录STOCs浴液(mmol/L)：NaCl134，CaCl21.8，MgCl21，KCl6，Glu10，pH值用NaOH调至7.4左右。酶I（mg/ml）：木瓜蛋白酶0.86，二硫苏糖醇（DTT）1.5，白蛋白2.0。酶II（mg/ml）胶原酶1.24，透明质酸酶1.5，白蛋白1.5分别用无钙台式液溶解于小瓶内。　　1.2猪冠状动脉平滑肌细胞急性酶分离　　参照　　2结果　　2.1电流的电压依赖性随机性及变异性　　TP为-30mV，钳制时间(clamptime,CT)为100s时，可在76%的细胞(13例细胞中有1

7、0例能记录到)上记录到随机性STOCs，峰值幅度与频率均具有较大的变异性。表明该电流具有明显的电压依赖性，随着去极化电压的增大，通道电流幅值和频率逐渐增加(n=5)。见图1（A，B）。　　2.2卡律蝎毒素(charybdotoxinChTX)对STOCs的影响　　在浴液中加入BKCa通道的特异性阻断剂ChTX，200nmol/L的ChTX可完全阻断记录到的外向电流(n=6)。见图2。　　2.3不同浓度ATP和UTP对STOCs的作用　　向浴液中加入UTP，使其终浓度分别为5、10、50、100μmol／L时，STOCs电

8、流幅度及电流频率逐渐增加，呈浓度依赖性。对ATP和UTP终浓度为50μmol／L时的数据进行统计，UTP使二者由（23.53±2.55）pA、（0.2167±0.0217）Hz；增加到（40.76±5.75）pA，（0.3695±0.0358）Hz(n=7，P<0.01)，ATP使STOCs的电流幅度和电流频率