生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响论文

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1、生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响论文.freelorphology;ｍｉｃｅ脾虚证是中医常见证型，可见于消化系统多种疾病，现代研究表明，中医的脾本质是以消化系统为主的多系统功能综合单位，脾虚主要表现在小肠功能的改变［１］。小肠既是药物吸收的主要场所，又是脾虚证主要病变部位，且人参具有益气健脾之功效。基于此，本研究旨在观察生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响。１材料与方法１．１材料１．１．１动物健康雄性昆明种小鼠，清洁级，体质量（２０±２）ｇ，由湖南中医药大学实验动物中心提供，合格证号：医动字号２０－００２。１．１．２药物购置生晒参药材，由湖南省中

2、药超微工程技术中心检测合格后，按有关工艺分别加工为超微和传统饮片。传统饮片第１次煎加水５００ｍＬ，煎汁１５０ｍＬ，第２次煎加水３００ｍＬ，煎汁１５０ｍＬ，将两次煎液混匀；超微饮片先６０℃开水１０００ｍＬ搅拌，静止１０ｍｉｎ，纱布过滤取上清液，再加水１０００ｍＬ，如前取上清液，两次煎液混匀。将传统饮片及超微滤液分别浓缩成每毫升含生药１ｇ，冷藏备用。１．１．３试剂与仪器利血平注射液，广东邦民有限公司产（批号：０４０６２０，规格：１ｍL／ｍｇ）；ＢＸ－５１光学显微镜（日本Ｏｌｙｍｐｕｓ公司），８８００型超薄切片机（ＬＫＢ公司），Ｈ－６００透射电镜（日立公司）。１．２方法１

3、．２．１动物分组与造模将小鼠随机分为５组，分别为正常组、空白对照组、生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组（含生药２．５ｇ／ｋｇ）及生晒参超微饮片１／２剂量组（含生药１．２５ｇ／ｋｇ）。除正常组外，余４组采用利血平法制备脾虚动物模型［２］，即按皮下注射利血平０．２５ｍｇ／ｍＬ每天１次，连续注射１４ｄ。１．２．２给药方法模型制备成功后，空白对照组灌胃生理盐水２０ｍＬ／（ｋｇ·ｄ），生晒参汤剂组、生晒参超微饮片全剂量组均灌胃含生药２．５ｇ／ｋｇ（按成人７０ｋｇ体质量每次服用１０ｇ折算２倍量给药），生晒参超微饮片１／２剂量组灌胃含生药１．２５ｇ／ｋｇ，连续给药１２ｄ。１．２

4、．３观察方法造模及给药后分别脱颈处死小鼠，取小肠空肠段，经０．０１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ冲洗后，作光镜、电镜观察。１．２．４光镜标本制备处死动物后，取空肠１ｃｍ组织，４％多聚甲醛固定２４ｈ，常规脱水，沿纵轴方向石蜡包埋，切片ＨＥ染色，光镜观察。１．２．５透射电镜标本制备样品经２．５％戊二醛固定后，０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ漂洗，１％锇酸后固定，０．１ｍｏｌ／ＬＰＢＳ漂洗，丙酮逐级脱水（浓度为５０%、７０%、９０%、１００％）后，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂与１００％丙酮１∶１比例浸泡，Ｅｐｏｎ８１２环氧树脂浸泡、包埋，ＬＫＢ公司８８００型超薄切片机切片，醋酸铀、硝酸铝双重染色后，日

5、立Ｈ－６００透射电镜观察。２结果２．１生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜形态学的影响正常组未见任何病理性变化，小肠绒毛结构正常，黏膜上皮无变化，固有膜正常，肠腺无改变（见图１①）。模型制备成功后，脾虚小鼠小肠绒毛变细变短，肠上皮变矮，柱状上皮立方形改变，固有膜空泡样改变（见图１②）。生晒参超微饮片全剂量组与正常对照组的组织学观察基本一致（见图１③④），生晒参超微饮片1/2剂量组小肠黏膜改变趋于正常（见图１⑤⑥）。生晒参汤剂组：小肠绒毛基本正常，上皮部分稀散不完整，肠腺变小，可发现弥散淋巴组织，游离面上皮立方形改变，固有膜空泡样改变（见图１⑦）。空白对照组小肠绒毛及肠腺

6、基本正常，游离面绒毛上皮松散。柱状上皮立方形改变，固有膜松散，空泡样改变（见图１⑧）。２．２生晒参超微饮片对脾虚小鼠小肠黏膜超微结构的影响正常组表面微绒毛丰富，排列规则整齐，胞浆内线粒体丰富（见图２①），固有结构正常（见图２②）。脾虚模型组上皮细胞轻度肿胀，微绒毛略显稀疏，胞浆线粒体肿胀，嵴丢失呈空泡变，固有膜局灶水肿，细胞水肿空泡样变（见图２③）。由此可见，正常组与脾虚模型组有显著差异，证明脾虚模型制备成功。生晒参超微饮片全剂量组，细胞结构趋于正常，上皮细胞内可见散在颗粒（见图２④⑤）。生晒参超微饮片１／２剂量组，病变基本同生晒参超微饮片全剂量组，绒毛略比正常稀疏

7、，胞浆内部分线粒体有轻度肿胀，嵴较松散，上皮细胞内见散在圆形颗粒，固有膜改变不明显（见图２⑥）。生晒参汤剂组，上皮细胞变矮，细胞间隙不清晰，微绒毛变短，胞浆内线粒体丰富，部分结构不清晰，固有膜改变不明显（见图２⑦）。空白对照组，上皮细胞柱状，微绒毛基本整齐，固有膜仅见局灶细胞间隙有增宽，腺细胞内见丰富的溶酶体，亦可见少数腺细胞有固缩，呈凋亡改变（见图２⑧）。３讨论脾虚小鼠出现的腹泻症状及光镜下小肠组织损伤等表现，说明脾虚与小肠黏膜有相关联系。《素问·经脉别论》曰：“人以水谷为本，故人绝水谷则死，脉无胃气亦死”，小肠黏膜上皮在机体消化过程中主要发挥消化和吸收功能，