伤科接骨片对家兔骨折模型肾组织转化生长因子β1表达的影响论文

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1、伤科接骨片对家兔骨折模型肾组织转化生长因子β1表达的影响论文张继平张奋耿宫丽姚晖邱建文林爱华许碧莲吴铁【摘要】【目的】观察伤科接骨片对模型家兔骨折愈合过程中肾组织转化生长因子β1（TGFβ1）表达变化的影响。【方法】选用36只雄性新西兰家兔，均复制成单侧桡骨中上1/3标准骨折模型；随机分为模型对照组和伤科接骨片组，每组18只，每组再分3个亚组，每个亚组6只。术后第2天开始给药，于术后第11、21和35天分别处死各亚组动物，取肾脏，采用免疫组化染色.freelpusJapan）。1.3骨折模型复制［6］用30g/L戊巴比妥钠（1mL/kg）经

2、耳缘静脉麻醉，剪毛后常规消毒铺巾，切开皮肤，分离组织，暴露桡骨，用牙科电钻在右侧桡骨中、上段1/3交界处（即旋前圆肌止点附近）横行锯断一侧骨皮质，造成3mm宽的骨缺损，保留尺骨完整。逐层缝合，包扎伤口，但不固定。骨折术后即肌肉注射青霉素（4×105U/只）,每日1次，共3d，5d后拆除皮肤缝线。1.4分组及给药36只造模成功的骨折家兔随机分为模型对照组和伤科接骨片组，每组18只。每组再分3个亚组（分别于术后11、21、35d处死），每个亚组6只。动物单笼饲养，术后第2天开始给药，伤科接骨片组给予含伤科接骨片的饲料（按150mg·kg-1·d-1的

3、药量将药片加入标准颗粒饲料中制成含药饲料）120g，模型对照组给予标准颗粒饲料120g，每天1次，直至处死。1.5肾组织标本留取家兔分别于术后第11、21、35天以戊巴比妥钠麻醉后心脏放血处死，腹正中切口取肾脏去包膜，置入Bouin液中固定。1.6免疫组织化学染色肾组织固定后，经常规酒精脱水，石蜡包埋，制成4μm切片，37℃恒温箱过夜；采用链霉亲和素-生物素复合物法（SABC法）检测TGFβ1，切片脱蜡至水，依次经体积分数0.3%H2O2室温15min，复合消化液室温10min，正常血清封闭液37℃、30min，兔抗TGFβ1多克隆抗体（1：

4、150）4℃过夜；生物素化羊抗兔IgG37℃、30min，SABC试剂37℃、30min；33二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木精对比染色；脱水、透明、封片；用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照，用试剂盒内阳性切片作阳性对照。1.7结果判断及图像分析以肾小管间质细胞浆内有棕黄色颗粒为阳性。将免疫组化切片置显微镜下（×400），对所测视野进行准确定位后由摄像系统提取数值化细胞图像输入病理图像分析系统进行处理，每例随机选取8个完整而不重叠的视野进行定量分析，以TGFβ1蛋白免疫组化反应阳性颗粒的染色强度（灰度值）和阳性颗粒面积与视野面积

5、的阳性面积比率来反映肾组织TGFβ1的表达水平。1.8统计学方法采用SPSS11.0软件进行数据的统计分析。2结果2.1各组肾组织免疫组化染色比较骨折术后第11天，相当于血肿机化演进期，伤科接骨片组呈强阳性染色，见图1-b1，而模型对照组阳性染色弱，见图1-a1；骨折术后第21天，相当于原始骨痂形成期，伤科接骨片组呈阳性染色，染色深，面积广，见图1-b2，而模型对照组阳性染色浅，面积小，见图1-a2；骨折术后第35天，相当于骨痂改造塑形期，伤科接骨片组呈弱阳性染色，见图1-b3，而模型对照组染色较浅或未见明显染色，见图1-a3。a1模型对照组（

6、第11天）a2模型对照组（第21天）a3模型对照组（第35天）b1伤科接骨片组（第11天）b2伤科接骨片组（第21天）b3伤科接骨片组（第35天）图1各组肾组织转化生长因子表达比较（免疫组化，×400）（略）Figure1parisonofrenalTGFexpressionindifferentgroupsdetectedbyimmunohistochemicalassay2.2各组肾组织TGFβ1表达染色强度比较表１结果显示，骨折术后第11天，伤科接骨片组呈强阳性染色，而模型对照组阳性染色弱，两组比较差异有显著性意义（Ｐ＜０.０１）；骨折术

7、后第21天，伤科接骨片组呈阳性染色，而模型对照组阳性染色浅、面积小，两组比较差异有显著性意义（Ｐ＜０.０５）；骨折术后第35天，伤科接骨片组呈弱阳性染色，而模型对照组染色较浅或未见明显染色，两组染色强度比较差异无显著性意义（Ｐ＞０.０５）。2.3各组肾组织TGFβ1表达阳性面积比率比较表２结果显示，骨折术后第11天，伤科接骨片组肾组织TGFβ1表达阳性面积比率较模型对照组高，差异有显著性意义（Ｐ＜０.０１）；骨折术后第21天，伤科接骨片组肾组织TGFβ1表达阳性面积比率也较模型对照组高，差异有显著性意义（Ｐ＜０.０５）；骨折术后第35天，伤

8、科接骨片治疗组肾组织TGFβ1表达阳性面积比率与模型对照组比较差异无显著性意义（Ｐ＞０.０５）。表1各组骨折模型家兔肾组织TGFβ1