cx43对大鼠急性水中毒后脑水肿的影响

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1、Cx43对大鼠急性水中毒后脑水肿的影响【摘要】目的:探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)对大鼠急性水中毒后脑水肿的影响.方法:术前2h于右脑室注射Cx43阻断剂反义寡核苷酸（ODNs)或生理盐水，大鼠脑水肿由急性水中毒后引起，用抗－胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组织化学标记法观察脑皮质星形胶质细胞形态、数量的变化；用比重梯度法测定脑组织比重.结果:急性水中毒后脑水肿生理盐水对照组脑皮质区GFAP阳性细胞较ODNs预处理组多（P<0.05）,细胞胞体较肥大；生理盐水对照组脑组织比重较ODNs处理组降低明显

2、（P<0.05）.结论:阻断Cx43可减轻大鼠急性水中毒后脑水肿的程度，Cx43可能参与了脑水肿的形成.【关键词】脑水肿星形胶质细胞缝隙连接蛋白43　　0引言　　脑水肿是神经科危重患者常见的一种病变,也是脑血管病、颅内占位性病变、颅脑损伤和炎症等过程的主要病理生理改变.超微结构显示,在脑水肿早期主要表现为星形胶质细胞肿胀,它可能是脑水肿发生发展过程中的一个重要因素［1］.而对星形胶质细胞膜上主要表达的Cx43是否参与脑水肿形成的研究很少.我们初步探讨了Cx43与水中毒后脑水肿的相关性.　　1材料和方法　

3、　1.1材料健康清洁级SD大鼠48只，体质量230～250g(第四军医大学实验动物中心)；小鼠抗GFAP抗体、兔抗鼠IgG稀释液、生物素卵白素过氧化物酶复合物ABC,DAB（美国Sigma公司）；溴苯（天津市福晨化学制品厂）；煤油(西安化学试剂厂)；反义寡核苷酸序列:5′ACTCCAGTCACCCAT3′(上海生工合成).　　1.2方法　　1.2.1实验分组将大鼠随机分为Cx43阻断剂预处理组和生理盐水对照组.急性水中毒后两组将存活大鼠按脑水肿后处死时间点随机分为20，30，60min3个亚组；每亚组8

4、只，其中5只用做免疫组化，3只用于测脑组织比重.　　1.2.2动物模型制作参照　　2结果　　2.1免疫组化染色急性水中毒后20min生理盐水对照组和ODNs预处理组GFAP阳性星形细胞肿胀不明显；30min时细胞逐渐肿胀，细胞数量逐渐增多；60min时细胞胞体明显肿胀，细胞个数明显增多；但两组大鼠在急性水中毒后各时间点二亚组间相比，生理盐水对照组细胞肿胀明显，胞体肥大深染，突起粗大；生理盐水较对照组细胞个数增多明显；两组相比有显著差异(P<0.05，图1，表1).　　A～C：生理盐水对照组急性水中毒后2

5、0,30,60min；D～F：ODNs预处理组急性水中毒后20,30,60min.标尺=50μm.　　图1各时间点脑水肿生理盐水对照组与ODNs预处理组大鼠脑皮质区GFAP免疫阳性细胞DAB×20（略）　　表1各时间点对照组与ODNs预处理组大鼠脑皮质区GFAP阳性细胞数（略）　　aP<0.05vs生理盐水对照.　　2.2液体比重柱的稳定性和梯度均匀性共制作了5个比重梯度柱，反映比重柱高度与比重直线相关性的指标决定系数(coefficientofdetermination,r2)均≥0.998.表明制

6、作的液体比重柱的稳定性和梯度均匀性均较佳.　　2.3脑组织比重急性水中毒20，30，60min后，随时间延长，两组大鼠脑皮质区脑组织比重均逐渐降低，说明脑组织含水量逐渐增多；但在急性水中毒后各时间点两亚组比较，生理盐水对照组脑组织比重较ODNs预治疗组降低明显（P<0.05，表2）.　　表2各时间点脑水肿对照组与ODNs预处理组大鼠脑皮质区组织比重（略）　　aP<0.05vs生理盐水对照.　　3讨论　　缝隙连接蛋白(connexins,Cx)是一个蛋白超家族,目前在哺乳动物中发现的Cx至少有20种

7、［5］,在哺乳动物脑内,星形胶质细胞上主要表达Cx43.6个结构相同的Cx在细胞膜上形成六聚体结构构成缝隙连接半通道［6］，相邻两个细胞各自胞膜上的缝隙连接半通道对接而成缝隙连接(GJ).星形胶质细胞间及星形胶质细胞和神经元、其它胶质细胞间存在广泛的GJ［7］，使细胞间进行信息、能量和物质的交换，参与细胞间物质交换的代谢偶联和电信号传递的电偶联，对细胞的新陈代谢、内环境稳定等生理过程起着重要的调控作用.星形胶质细胞上表达的水通道蛋白4（AQP4）主要参与水的转运，在形态上已有