脐带源间充质干细胞促进造血细胞在nod-scid小鼠归巢

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1、脐带源间充质干细胞促进造血细胞在NOD/SCID小鼠归巢作者：张浪辉，陈志哲，吕璐璐，王爱萍，韩忠朝，刘拥军【关键词】间充质干细胞；,,脐带；,造血干细胞；,受体,淋巴细胞归巢；,移植　　摘要:目的探讨脐带源间充质干细胞（hUCMSC）在促进造血细胞归巢，提高造血干细胞植入中的作用。方法RTPCR检测经体外培养扩增所得hUCMSC归巢相关分子的表达；将hUCMSC和CFDASE荧光标记的人脐带血单个核细胞（MNC）植入NOD/SCID小鼠建立共移植模型，分离共移植24h后小鼠骨髓有核细胞，用流式细胞仪

2、和荧光倒置显微镜观察脐带血造血细胞在NOD/SCID小鼠骨髓中含量的变化。结果hUCMSC表达SDF1及其受体CXCR4以及相关黏附分子CD11a/ICAM1、CD49d/VCAM1；在hUCMSC共移植情况下，流式细胞仪检测和荧光显微镜下细胞计数均发现人脐带血MNC在小鼠骨髓中的含量与单独脐带血移植相比较有显著提高〔（145±59)/1×105vs(298±72)/1×105；(755±158)/5×105vs(1598±227)/5×105个骨髓有核细胞；n=9,P<0.05）〕。结论hUC

3、MSC具有表达化学趋化因子及相关黏附分子的特性，有利于实现自身的归巢定位并引导造血干祖细胞的有效归巢与植入;动物模型的建立进一步证实其引导脐带血MNC在NOD/SCID小鼠体内向造血龛――骨髓富集（归巢）的作用。　　　基础和临床研究揭示，造血干细胞移植的过程再现了胚胎发育时期和出生后造血干细胞从血液循环进入骨髓造血区域（造血干细胞的归巢）的全过程，这种移植初期的造血细胞正确归巢对于移植后的造血重建和有效恢复、提高移植的存活率是至关重要的环节[12]。但对于需要接受造血干细胞移植的患者，由于疾病和治疗的

4、影响，造血干细胞归巢所必须具备的相关环境遭到不同程度的破坏，直接导致造血前体细胞不能很有效的定位于骨髓造血区域，大大降低了造血干细胞的有效植入和维持长期造血的预期效果[3]。因此，尽可能提高造血干细胞的归巢率，继而提高临床造血干细胞移植的成功率是值得深入探讨的课题。作为造血微环境主要细胞成分――基质细胞的干/祖细胞，间充质干细胞（MSC）通过自我更新和多向分化构建起稳定的造血微环境，在造血干细胞的生长和增殖分化中发挥重要作用[4]。本课题组已通过二步酶解法从健康胎儿脐带中成功分离扩增到足够满足临床治疗

5、需要的脐带源间充质干细胞（hUCMSC）[5]。笔者通过RTPCR检测hUCMSC归巢相关分子的表达并通过建立造血共移植的NOD/SCID小鼠动物模型，观察在hUCMSC共移植条件下脐带血造血细胞在NOD/SCID小鼠归巢情况的变化，旨在揭示hUCMSC在促进造血细胞归巢中的作用。　　1材料与方法　　1.1主要试剂TRIzolTMReagent（美国LifeTechnoloies公司）；MMLVRrverseTranscriptaseKit（美国Invitrogen公司）；TaqDNA聚合酶体系和DN

6、AMarker(DL2000MARK，日本Takala公司）；DMEMLG/DF12培养液（美国Sigma公司）；Ficoll淋巴细胞分离液（美国PharmaciaBiotech公司）；细胞示踪剂VybrantTMCFDASECellTracerKit（美国MolecularProbes公司）；红细胞裂解液（FACSLysingSolution，美国BectonDickinson公司）。　　1.2RTPCR检测hUCMSC促进造血植入相关分子的表达　　1．2．1设计引物检索MedlineGeneBan

7、k人基质细胞源因子1(SDF1)及其受体趋化因子CXC受体4（CXCR4）以及淋巴细胞功能相关抗原1α链(CD11a)/细胞间黏附分子1(ICAM1，CD54)、整合素α4（integrinalpha4，CD49d）/血管细胞黏附分子1(VCAM1，CD106)等的基因序列，设计相应的引物序列：　　SDF1（251bp）　　S:5’CCCTTCAGATTGTAGCCCGG3’　　A:5’CGATCCCAGATCAATGTGCC3’　　CXCR4（137bp）　　S:5'CAACGTCAGTGAGGCA

8、GATG3'　　A:5'ATGCAATAGCAGGACAGGATGA3'　　CD11a（305bp）　　S:5’CTGGCAGAAAGCAAATGTGA3’　　A:5’ACCAAGTGTGACGTGAGCTG3’　　CD49d（185bp）　　S:5’GTTCGGCTACTCGGTCGTG3’　　A:5’GGTTCTCTATTAGGGCGTC3’　　CD54（267bp）　　S:5’TATGGCAACGACTCCTTCT3’　　A:5’CATTCAGCG