tab检测方法汇总

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1、TAB检测方法一、美国库格方法（K氏培养基）1、设备及材料1.1天平1.2水浴锅1.3灭菌三角烧瓶（500ml,250ml）1.4酒精灯1.5抽滤装置（过滤器和抽滤机）1.60.45μm滤膜（φ50mm）1.7医用镊子1.8灭菌平皿（φ90mm）1.9培养箱2、培养基的制备2.1在1L烧瓶里放入如下配料蒸馏水或去离子水900ml酵母浸膏（OX）2.5g0.25%蛋白胨（MERK）5.0g0.50%葡萄糖（MERK）1.0g0.10%吐温801.0g0.10%琼脂粉（北京奥博星）15g1.5%在121℃、15磅压力下高压灭菌15min，放置于46℃水浴里。取2.5g苹果酸于100ml的烧杯

2、里，加蒸馏水或去离子水100ml混匀并通过0.22μm滤膜过滤除菌。2.2苹果酸溶液到调制的K-培养基里并小心混合，调整培养基pH值为3.7±0.1，注入酸化的培养基到灭菌平板里，让其凝固备用。3、操作步骤3.1、检样处理3.1.1称取10克浓缩苹果清汁于250ML三角烧瓶里，加蒸馏水或去离子水90ML。3.1.2在80℃水浴上摇动加热13min（当样品温度达到80℃时开始记时）3.1.3在冷水里迅速冷却样品。3.2过滤培养3.2.1样品通过0.45微米的滤膜真空过滤。3.2.2移去过滤器的顶部，用无菌镊子从过滤器上移取滤膜放置在K-培养基平板上。3.2.3轻轻按压滤膜，使滤膜与培养基之

3、间没有气泡，保证与培养基接触。3.2.4将平板正面朝上置于41℃的培养箱内培养5天。4、菌落计数：计算滤膜上的菌落数。5、结果报告：报告每10克样品所含的菌落数。二、美国雀巢方法（K氏培养基）1、仪器和试剂A、仪器1.180°C水浴锅1.2温度计1.310ml移液管1.4培养皿,60x15mm,#1007,B-D,FalconPlastics,Oxnard,CA1.543°C的培养箱1.6带盖子的灭菌试管和试管架,20x150mm1.70.45um滤膜,灭菌的微孔过滤器,TYPEHA,#HAWG047S0,MilliporeCorp.,Bedford,MA017301.8塑料袋1.9显微

4、镜,微生物载玻片,盖玻片微孔过滤器，灭菌镊子B化学药品1.1苹果酸1.2灭菌的50ml蒸馏水空白1.3为洗涤过滤器和真空设备的灭菌蒸馏水C、试剂A）蛋白胨5g酵母粉2.5g葡萄糖1.0g吐温801.0g琼脂粉15g.把这些成分加入到990ml的蒸馏水中，加热使其沸腾。高压灭菌121°C15分钟，使用之前冷却到45°C，用25%灭菌的苹果酸溶液调节pH达到3.7B）25%的苹果酸,必须经过无菌过滤并且在使用之前加到K氏培养基中.2、检测步骤样品准备用一个15ml的广口吸管,以无菌操作移取10ml样品并且将其加到20x150mm的无菌试管中.另外再取15ml样品加入到另一个试管中(温度控制用

5、),给此试管中插入一个温度计.1.将两个试管都放入到80°C的水浴中.(水浴锅中的水面应高于试管中的样品).当温度控制用的试管中的温度计达到80°C时,开始计时10分钟.2.10分钟后,迅速将试管放入冰浴.3.将10ml经过热处理的样品加到50ml的灭菌水中.4．用真空泵将此60ml全部通过0.45µm的滤膜.用10-20ml的灭菌蒸馏水冲洗这个瓶子和过滤器.确信这张膜被真空抽干.将这张滤膜放到K氏培养基上.为了防止气泡,小心的使滤膜滚贴到K氏培养基上,并且用无菌的镊子轻敲滤膜,使滤膜的边缘紧贴在培养基上.5.用密封的容器(塑料袋)将此培养基在43°C培养3-5天.6.计数平板上所有的菌

6、落并且报告每10ml中检出的耐酸耐热菌的结果.三、日本嘉吉方法（YSG培养基）1仪器和试剂1.1恒温水浴锅：70±1℃1.2恒温培养箱：45±1℃。1.3灭菌培养皿：直径为90mm。1.4滤膜：0.45um水系一次性滤膜。1.5灭菌三角瓶：500ml。1.6灭菌蒸馏水。1.7YSG培养基的配制：A组：酵母粉（MERCK）：2.0g葡萄糖：1.0g可溶性淀粉(MERCK)：2.0g蒸馏水：500ml把A组用1-2N硫酸或盐酸调至PH为3.7±0.1；B组：琼脂（MERCK）：15.0g蒸馏水：500ml把A组和B组分别在121℃15分钟条件下灭菌，冷却至50—60℃，把两者混合。2、操作步

7、骤2.1取样品50ml于一个无菌瓶中，另取同样品同体积于一个相同的瓶中做温度控制用，在温度控制瓶中插入温度计。2.2把两个瓶都放入到70℃的水浴中。(水浴锅中的水面应高于瓶中的样品)，当温度控制瓶中的温度计达到70℃时，开始计时20分钟。2.320分钟后，迅速将样品放入冰浴。2.4将经过热处理的样品加灭菌水稀释，稀释倍数约10倍左右。用真空泵将此样品全部通过0.45µm的滤膜。用灭菌蒸馏水冲洗这个瓶子和过滤器。确信这张膜被真空抽干。