归脾汤对抑郁模型大鼠血清雌二醇、皮质酮及海马形态学的影响

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1、归脾汤对抑郁模型大鼠血清雌二醇、皮质酮及海马形态学的影响【摘要】目的：观察归脾汤对抑郁模型大鼠血清皮质酮、雌二醇(E2)水平和海马形态学的影响，初步探讨其防治抑郁症的可能机制。方法：40只in)、冰水游泳(4℃，5min)、摇晃(1min)、夹尾(1min)、禁水(24h)、禁食(24h)等，每种刺激使用3-4次。1.3给药方法空白组不给药;模型组只施加灌胃动作但不给药；对照组灌服2mL生理盐水；中药组灌服归脾汤。归脾汤组成：白术30g，茯苓30g，黄芪30g，龙眼肉30g，酸枣仁30g，人参15g，木香15g，甘草8g，当归3g，远志3g，购于辽宁中医药大学附属医院药局。按常规方法煎煮，

2、浓缩至2g/mL，4℃冰箱保存备用。根据临床成人用量折算成大鼠灌胃剂量，每天给药1mL/100g，于每次刺激前0.5h灌服，共给药21d。1.4大鼠体重和行为学检测于实验的第1天和第22天的9点开始，采用GS671电子秤(大连星海生物有限公司)按动物序号进行测量体重。之后可采用openfield法检测行为学得分，计数3min内大鼠的水平活动得分和垂直活动得分。检测过程中保证时间、光照、温度及环境噪音的一致性。1.5大鼠血清皮质酮、E2、FSH、LH水平检测在实验的第22天，1.4任务完成后，大鼠经20%乌拉坦(0.4mL/100g)麻醉，腹主动脉取血2mL，离心取血清，低温冷藏备用。采

3、用放免法检测血清皮质酮、雌激素浓度，此项工作由沈阳军区总医院内分泌实验室协助完成。1.6海马形态学观察1.5后每组取5只大鼠，升主动脉注射生理盐水清洗脑组织后，立即断头取双侧海马，置于10%甲醛中固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察海马CA3区神经元形态的变化。此项工作于辽宁中医药大学病理实验室完成。再取5只大鼠，经升主动脉150mL生理盐水快速冲去血液后，再快速灌入4℃2.5%戊二醛固定液。取双侧海马，修块，置于戊二醛中固定2h，PBS反复清洗后，再经1%锇酸固定2h，双蒸水冲洗，梯度乙醇脱水，临界点干燥，离子溅射真空渡膜，扫描电镜下观察并拍照。此项工作由辽宁中医药大学电镜室完成。1.7

4、数据处理数据以(±s)形式表示，采用SPSS10.0统计软件处理，统计方法采用ANOVA法、单因素方差分析和两两比较。2结果2.1各组大鼠体重的变化见表1。表1各组大鼠体重变化表1显示，第22天模型组和对照组大鼠体重较空白组显著下降(P＜0.05)，中药组则变化不大。2.2各组大鼠的行为学得分见表2。表2各组大鼠行为学得分(n=10,次/3min)组别水平垂直第1天第22天第1天第22天空白组49.3±9.046.2±8.711.6±3.411.1±3.0模型组50.4±9.030.3±9.2△11.3±3.24.9±2.1△对照组50.3±7.527.3±7.8△11.8±3.35.1±

5、2.4△中药组51.1±7.649.6±8.711.4±3.111.0±2.7注：与空白组比较，△P＜0.05　　由表2可见，同组大鼠第1天和第22天比较，空白组和中药组无明显差异，模型组和对照组得分则显著减少。2.3各组大鼠血清皮质酮、E2、FSH和LH水平见表3。表3各组大鼠血清皮质酮浓度、E2、FSH、LH含量的比较(n=10,pg/μL)组别皮质酮E2FSHLH空白组16.1±2.824.50±8.430.17±0.050.08±0.03模型组29.5±3.1△7.93±3.00△0.37±0.10△0.19±0.03△对照组30.4±4.1△11.08±3.29△0.35±0.1

6、1△0.18±0.01△中药组17.4±2.919.67±5.770.21±0.080.10±0.02注：与空白组比较，△P＜0.052.4各组大鼠海马CA3区神经元的组织学2.4.1光镜观察空白组CA3区有大量致密锥体细胞，排列整齐，细胞完整，边缘清晰。模型组和对照组可见细胞层次减少，细胞层紊乱、稀疏、中断，大量细胞坏死。中药组神经元形态与空白组基本接近。2.4.2电镜观察空白组细胞器丰富，轮廓清晰，细胞核呈圆形，核膜清晰光滑完整，核染色质分布均匀。模型组和对照组细胞器减少，线粒体空泡化，细胞核变小，不规则，且核膜增厚，核周电子密度降低。中药组与空白组基本相同。3讨论　　抑郁症的发生机制

7、尚不清楚，可能与慢性应激刺激导致的海马结构损伤有关，如长期不良处境及生活事件可作为慢性应激刺激，持续激活下丘脑－腺垂体－肾上腺皮质轴，导致糖皮质激素水平持续升高，从而损伤海马结构。而女性在月经周期或更年期，体内雌激素水平处于明显的波动状态［67］，影响了雌激素的神经元保护作用，如再有负性情绪或生活事件，则海马结构极易受损，出现抑郁情绪，甚至发展为抑郁症的可能性将明显增加［89］。因此对女性来说，维持正常的糖皮质激素和