反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量

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1、反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量作者：卢来春，张蓉，刘同华，蒋学文【摘要】目的:采用反相高效液相色谱法测定吸入用异丙托溴铵溶液的含量。方法:色谱柱为phenomenexC8（4.6mm×250mm，5μm），流动相为乙腈0.25%庚烷磺酸钠溶液（29∶71）用磷酸调pH值至3.2；检测波长为210nm；流速为1.0mL/min；进样量20μL。结果:异丙托溴铵在12.8～256μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系，r=0.9995，日间、日内RSD均小于1.5%。结论：本方法准确可靠，可用于吸入用异丙托溴铵溶液的质量控制【关键词】异

2、丙托溴铵；含量测定；高效液相色谱法异丙托溴铵是一种具有抗胆碱能特性的四价铵化合物，可竞争性抑制乙酰胆碱对气道平滑肌的收缩作用。通过抑制细胞内cGMP生成，减少cAMP降解，降低细胞内钙离子浓度，使气道平滑肌松弛，肥大细胞释放炎性介质下降，终止气道扩张，呼吸阻力减小。吸入异丙托溴铵后，作用只限于肺部扩张支气管，而不作用于全身，主要采用气雾吸入给药［1］。吸入用异丙托溴铵溶液在临床上应用较广泛，主要采用压缩雾化吸入或超声雾化吸入给药，常用于预防和治疗儿童支气管哮喘。本文考察了异丙托溴铵含量的HPLC测定方法，为制剂的质量控制提供了方法学依据。　　1仪器与材料L

3、C10ATvp高效液相色谱仪（日本岛津公司）；异丙托溴铵对照品（购自浙江优联医药化工有限公司，经精制后色谱峰为单峰）；吸入用异丙托溴铵溶液（爱全乐）购自德国勃林格殷格翰国际公司（批号638066，规格为含异丙托溴铵2mL∶500μg）；庚烷磺酸钠为离子对色谱试剂，纯度≥99％，购自上海亿日化工科技有限公司；乙腈为色谱纯；其它试剂为分析纯。　　2含量测定　　2.1色谱条件参照　　2.5最低检测限和最低定量限取异丙托溴铵对照品适量，精密称定，加溶剂溶解并稀释制成供试液，按上述色谱条件取10μL进样。经试验，当进样浓度为0.3μg/mL时，信噪比为3∶1，即最

4、低检测限为0.3μg/mL×10μL=3ng；当进样浓度为1.1μg/mL时，信噪比为10∶1，即最低检测限为1.1μg/mL×10μL=11ng。　　2.6线性范围考察取对照品储备液，分别精密吸取0.1、0.2、0.4、0.8、2.0mL，置10mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，得浓度依次为12.8、25.6、51.2、102.4、256μg/mL的系列标准溶液。照上述色谱条件，进样20μL，以样品浓度C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为：A=5900.864C+16415，r=0.9995，线性范围为12.8～256μg/m

5、L。　　2.7精密度试验分别取12.8、51.2、2560μg/mL三种浓度的对照品溶液，于1d内分别进样5次及5d内分别进样5次，分别计算日内、日间RSD。结果见表1。表1精密度试验结果（略）　　2.8样品溶液稳定性试验取批号为638066的样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，在12h内每隔3h进样测定1次，测得RSD为1.30%，表明在12h内样品溶液稳定性较好。　　2.9重复性试验取批号为638066的样品，按“2.3”项下方法平行制备5份供试品溶液，分别进样，测得RSD为1.03%，表明该法重复性较好。　　2.10回收率试验取异丙托溴铵对照品

6、约16mg、20mg和24mg各三份，精密称定，按处方比例加入空白辅料适量，按“2.1”项下色谱条件进样测定含量，计算回收率，结果见表2。表2回收率试验结果（略）　　2.11样品含量测定取批号为638066样品，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，依法测定，样品含量测定结果为98.8%。　　3讨论异丙托溴铵为溴化季铵盐，在溶液状态下，其溴以离子形式存在［3］，在210nm处有一定紫外吸收。为验证该测定方法溴离子的存在不影响异丙托溴铵的含量测定，故选定溴化钾进行了试验。试验表明，采用该测定方法，溴离子不干扰异丙托溴铵的含量测定。流动相采用等度洗脱系统，用二极

7、管阵列检测器测定异丙托溴铵对照品的峰纯度大于99.8%，表明主峰为单一峰，在210～400nm波长扫描，未漏检杂质峰。异丙托溴铵浓度在12.8～256.0μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。本方法灵敏度高，方法准确，重复性好，且操作简单，可用于吸入用异丙托溴铵溶液的质量控制。【参考