大鼠蛛网膜下腔出血后海马中ｂｃｌ－２和ｂａｘ的ｍｒｎａ表达

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1、大鼠蛛网膜下腔出血后海马中Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ的ｍＲＮＡ表达作者：林琳　李冬松　陶春　汤文丽　吕品　刘月英　宋宝华　宝鲁尔【摘要】目的通过对大鼠实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的观察，对缺血缺氧造成的脑损伤机制进行探讨。方法用反转录聚合酶链式反应技术检测大鼠SAH后CVS时海马组织Bcl-2和BaxmRNA的表达变化。结果Bcl-2mRNA的表达水平在蛛网膜下腔组1d时即开始下降，5~7d时降至最低。BaxmRNA的表达1d呈上升趋势，5~7d时达最高。在对照组和假手术组海马组织内的Bcl-2和BaxmRNA的表达水平保持相对恒定。结论提示Bcl

2、-2和Bax可能参与了缺血缺氧所致的神经元损伤。　　【关键词】蛛网膜下腔出血；海马；大鼠；Bcl-2；Bax　　　　【Abstract】ObjectiveThroughtheratcerebralvasospasmaftersubarachnoidhemorrhageobservation，thehypoxicischemicbraininjurycausedbythemechanismdiscussed.MethodsUsereversetranscription-polymerasechainreactiontestafterSAHCV

3、SrathippocampusRNAexpressionof.ResultsBcl-2mRNAexpressioninsubarachnoidhemorrhageadaythatstartedtodecline,5~7daystoaminimum.BaxmRNAexpressionofanupaximum.InthecontrolgroupandtheshamgrouppusoftheBcl-2andBaxmRNAexpressionlevelsremainedrelativelyconstant.ConclusionBcl-2andBaxma

4、ybeinvolvedinthehypoxicischemicdamagecausedbytheneuronsdamage.　　【Keyorrhage；Hippocampus；Rats；Bcl-2；Bax　　　　蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage，SAH），后40%~80%发生迟发性脑血管痉挛(cerebralvasospasm，CVS)[1]，导致脑缺血和缺氧，严重时发生梗死，成为致死致残的主要原因[2]。本实验采用大鼠枕大池二次注血法建立CVS动物模型，利用反转录聚合酶链式反应技术动态观察SAH后海马组织内Bc

5、l-2和BaxmRNA的表达变化，并对两者与神经元凋亡的关系及其与SAH后CVS导致缺血性脑损伤的机制进行探讨，为临床上有效防治CVS引起的脑损伤提供思路和依据。　　1材料与方法　　1．1动物与分组健康SD大鼠72只，体质量380~410g，雌雄不限，由吉林大学实验动物中心提供，动物随机分成9组，正常对照组8只、假手术组32只和SAH组32只，各组根据术后处死时间不同再分为假手术1、3、5、7d组和SAH1、3、5、7d组，每组各8只大鼠。如下分组：1组：正常对照组；2组：假手术对照1d组；3组：SAH1d组；4组：假手术对照3d组；5组：

6、SAH3d组；6组：假手术对照5d组；7组：SAH5d组；8组：假手术对照7d组；9组：SAH7d组。　　1．2试剂由北京鼎国生物技术有限责任公司提供。　　从基因文库中查到大鼠Bcl-x和Bax基因cDNA序列，应用Oligo5．0软件程序设计上、下游引物：引物设计：Bcl-2引物：上游5′-CCGGGAGATCGTGATGAAGT-3′；下游5′-ATCCCAGCCTCCGTTATCCT-3′。Bax引物为：上游5′-CCAAGAAGCTGAGCGAGTGTC-3′；下游5′-TGAGGACTCCAGCCACAAAGA-3′。利用上述引物

7、推导的PCR产物的大小分别为：Bcl-2，376bp；Bax，284bp。　　1．3方法　　1．3．1模型建立10%水合氯醛(0．35ml/100g)腹腔注射麻醉后，大鼠俯卧位固定于操作台上，项部备皮消毒。纵行切开颈部皮肤，暴露枕骨、环椎及环枕膜，用注射器针头刺破环枕膜到达枕大池，有脑脊液流出后，由左眼球后静脉丛抽取0．3ml无抗凝自体血，以0．1ml/min注射速度缓慢将0．15ml/100g的自体不抗凝血注入枕大池。明胶海绵压迫。将大鼠头低30°俯卧位30min，以利血液凝固沉积在脑底血管周围。大鼠保温复苏至清醒后自由饮食饮水。48h后

8、同法操作制成大鼠SAH动物模型。假手术组动物按上述方法在枕大池内注入同样量的生理盐水2次，对照组只做手术不注射。在第2次注射后第1，3、5、7天取脑待