大鼠蛛网膜下腔出血后海马中bcl-2和bax的mrna表达

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1、大鼠蛛网膜下腔出血后海马中Bcl-2和Bax的mRNA表达作者:林琳 李冬松 陶春 汤文丽 吕品 刘月英 宋宝华 宝鲁尔【摘要】目的通过对大鼠实验性蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的观察,对缺血缺氧造成的脑损伤机制进行探讨。方法用反转录聚合酶链式反应技术检测大鼠SAH后CVS时海马组织Bcl-2和BaxmRNA的表达变化。结果Bcl-2mRNA的表达水平在蛛网膜下腔组1d时即开始下降,5~7d时降至最低。BaxmRNA的表达1d呈上升趋势,5~7d时达最高。在对照组和假手术组海马组织内的Bcl-2和BaxmRNA的表达水平保持相对恒定。结论

2、提示Bcl-2和Bax可能参与了缺血缺氧所致的神经元损伤。  【关键词】蛛网膜下腔出血;海马;大鼠;Bcl-2;Bax    【Abstract】ObjectiveThroughtheratcerebralvasospasmaftersubarachnoidhemorrhageobservation,thehypoxicischemicbraininjurycausedbythemechanismdiscussed.MethodsUsereversetranscription-polymerasechainreactiontest

3、afterSAHCVSrathippocampuswhentheBcl-2andBaxmRNAexpressionof.ResultsBcl-2mRNAexpressioninsubarachnoidhemorrhageadaythatstartedtodecline,5~7days9toaminimum.BaxmRNAexpressionofanupwardtrend,5~7daystoamaximum.InthecontrolgroupandtheshamgroupwithinthehippocampusoftheBcl-2and

4、BaxmRNAexpressionlevelsremainedrelativelyconstant.ConclusionBcl-2andBaxmaybeinvolvedinthehypoxicischemicdamagecausedbytheneuronsdamage.  【Keywords】Subarachnoidhemorrhage;Hippocampus;Rats;Bcl-2;Bax    蛛网膜下腔出血(subarachnoidhemorrhage,SAH),后40%~80%发生迟发性脑血管痉挛(cerebralvasos

5、pasm,CVS)[1],导致脑缺血和缺氧,严重时发生梗死,成为致死致残的主要原因[2]。本实验采用大鼠枕大池二次注血法建立CVS动物模型,利用反转录聚合酶链式反应技术动态观察SAH后海马组织内Bcl-2和BaxmRNA的表达变化,并对两者与神经元凋亡的关系及其与SAH后CVS导致缺血性脑损伤的机制进行探讨,为临床上有效防治CVS引起的脑损伤提供思路和依据。  1材料与方法  1.1动物与分组健康SD大鼠72只,体质量380~410g,雌雄不限,由吉林大学实验动物中心提供,动物随机分成9组,正常对照组8只、假手术组32只和SAH组

6、32只,各组根据术后处死时间不同再分为假手术1、3、5、7d组和SAH1、3、5、7d组,每组各8只大鼠。如下分组:1组:正常对照组;2组:假手术对照19d组;3组:SAH1d组;4组:假手术对照3d组;5组:SAH3d组;6组:假手术对照5d组;7组:SAH5d组;8组:假手术对照7d组;9组:SAH7d组。  1.2试剂由北京鼎国生物技术有限责任公司提供。  从基因文库中查到大鼠Bcl-x和Bax基因cDNA序列,应用Oligo5.0软件程序设计上、下游引物:引物设计:Bcl-2引物:上游5′-CCGGGAGATCGTGATG

7、AAGT-3′;下游5′-ATCCCAGCCTCCGTTATCCT-3′。Bax引物为:上游5′-CCAAGAAGCTGAGCGAGTGTC-3′;下游5′-TGAGGACTCCAGCCACAAAGA-3′。利用上述引物推导的PCR产物的大小分别为:Bcl-2,376bp;Bax,284bp。  1.3方法  1.3.1模型建立10%水合氯醛(0.35ml/100g)腹腔注射麻醉后,大鼠俯卧位固定于操作台上,项部备皮消毒。纵行切开颈部皮肤,暴露枕骨、环椎及环枕膜,用注射器针头刺破环枕膜到达枕大池,有脑脊液流出后,由左眼球后静脉丛抽

8、取0.3ml无抗凝自体血,以0.1ml/min注射速度缓慢将0.15ml/100g的自体不抗凝血注入枕大池。明胶海绵压迫。将大鼠头低30°俯卧位30min,以利血液凝固沉积在脑底血管周围。大鼠保温复苏至清醒后自由饮食饮水

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