阿斯匹林类药物和α┐晶体蛋白保护酯酶的失活论文

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1、阿斯匹林类药物和α┐晶体蛋白保护酯酶的失活论文.freelmolL-1Asp可部分保护果糖和类固醇诱导酯酶的失活，尽管Ibu抑制酶活性，但其羧基化（Ibu-1）和羟基化（Ibu-2）代谢物有保护作用.α-晶体蛋白与酯酶摩尔比为11时，可完全特异地保护果糖、果糖6-磷酸和泼尼松龙-21-半琥珀酸诱导的酯酶失活;而在14时，保护率分别为67.0%.freelylation;steroidAbstract:AIMToinvestigatetheprotectioneffectofas-pirin-likedrugsandα-crystallinoninactivationofesterase

2、byglycation.METHODSBovineα-crystallinatography.Esterasecyanateandsteroidorolandα-crystallinrespectively.Theenzymeactivitieseter.RESULTSInactivationofesteraseylationandsteroidinaconcentration-dependantmanner.Steroiddisplayedamorerapidinactiva-tioneffectthanothers.10mmolL-1Aspirinpartiallypro-tect

3、edesteraseagainstinactivationbyfructoseandsteroid.AlthoughIbuprofeninhibitedesterase，itscarboxylated（I）andhydroxylated（II）metabolitesshoitedprotec-tion.α-Crystallinfullyprotectedesteraseagainstinactivationbyfructose，fructose6-phosphateandprednisolone-21-hemisucciateatamolarratioof11，butonlytothe

4、extentof67.0%，55.0%and38.3%ofactivityatamolarratioof14respectively.CONCLUSIONAspirinandibuprofenmayplayadifferentroleinprotectionenzymesagainstinactiva-tion.α-Crystallinactsasamolecularchaperonetoprotectes-teraseagainstinactivation.0引言临床流行病和实验研究表明阿斯匹林类药物作为非甾体类抗炎药，可预防和治疗白内障等一类结构性疾病（conformational

5、disease）.α-晶体蛋白分子伴侣（molecularchaperone）功能的发现，为白内障发病机制的研究提供了新的理论依据.糖化、氨甲酰化和长期大量应用激素等是白内障发病的主要危险因素［1-3］.酯酶具有重要的生理功能，糖尿病患者、实验性大鼠血浆及老年性白内障晶状体中酯酶活性下降，可能在糖尿病并发症和老化病程中起重要作用［4-7］.我们通过观察阿斯匹林类药物和α-晶体蛋白对酯酶的保护作用，探讨白内障的发病机制和潜在的治疗途径.1材料和方法1.1材料酯酶（猪肝脏羧酸酯酶EC3.1.1.1）、核糖、果糖、6-磷酸葡糖（G6P）、果糖6-磷酸、葡萄糖、氰酸钾、泼尼松龙-21-半琥珀酸

6、（P-21-H）、阿斯匹林（Asp）、布洛芬（Ibu）和扑热息痛（Para）、牛血清白蛋白和鸡蛋溶菌酶等均为Sigma公司产品.Ibu的两种主要代谢物2-［4（2-羧丙烷基）苯基］丙酸菌素酸（Ibu-1）和2-［4（2-甲基-2-羟丙烷基）苯基］丙酸菌素酸（Ibu-2）由Shyadehi等［8］提供.凝胶柱SephacrylS-300HR为Phamacia公司产品.1.2方法1.2.1α-晶体蛋白分离和纯化［9］8只1.5岁新鲜牛透明晶状体去囊膜，分离皮质和核，匀浆（0.05molL-1磷酸钠缓冲液、0.2molL-1KCl，1mmolL-1EDTA，1mmolL-1EGTA;pH6.

7、7），混合物以22440g离心40min.采用凝胶柱SephacrylS-300HR分离晶状体结构蛋白（凝胶柱100cm×2.3cm，流速25mLh-1），根据色谱图分别收集αH，αL，βH，βL和γ-晶体蛋白，透析24h，低温冷冻干燥，-20℃储存备用.SDS-PAGE检测α-晶体蛋白的纯度.1.2.2酶温育和活性测定［7］酯酶（5IU，30.3μg）溶解于50mmolL-1磷酸钠缓冲液（pH6.8），首先与果糖（0.45，0.9，5，10和