麝鼠香调控bcl

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1、麝鼠香调控Bcl【摘要】目的研究麝鼠香(Muskratmusk，Mrm)对大鼠心肌缺血(myocardialischemia，MI)模型心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法通过结扎大鼠左冠状动脉前降支复制大鼠MI模型。实验动物随机分为6组：假手术组、模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低(600、300、150mg·kg-1·d-1剂量组)。采用原位末端标记(TUNEL)法进行细胞凋亡指数检测;免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白表达。结果与模型组比较，麝鼠香高、中剂量组心肌细胞凋亡指数明显降低，B

2、cl-2蛋白表达水平显著升高，Bax蛋白表达明显降低，Bcl-2/Bax比值升高，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论麝鼠香通过调控Bcl-2/Bax蛋白表达，能有效抑制心肌细胞凋亡的发生，对缺血心肌提供保护作用。【关键词】麝鼠香;心肌缺血;细胞凋亡;Bcl-2;Bax麝鼠香(Muskratmusk，Mrm)为成年雄性麝鼠(OndadrazibethicaL.)香囊内乳白色分泌物。麝鼠在我国资源分布广，数量较多，且早在《回回药方》中就有记载，称之为“木阿里”[1]，并在回族民间广为流

3、传。麝鼠香不仅具有与天然麝香相似的香气，而且还含有很多相同的化学成分，如麝香酮(muscone)、降麝香酮(cyclopentadecanone)、大环酮类、肽和氨基酸类等[2]，具有抗炎、镇痛等与天然麝香极为相似的药理作用[3]。麝鼠香在降低心肌耗氧量及改善血液流变学方面，对犬及大鼠缺血心肌起到保护作用[4]。本研究拟探讨麝鼠香对大鼠急性心肌缺血损伤后期心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。　　1材料与方法　　1.1动物　　健康成年雄性Sprague-DapusBH-2型显微镜(OlympusCorp

4、，Japan);BL-2000医学图像分析系统(成都泰盟科技有限公司生产)。　　麝鼠香(吉林省康乃尔药业提供，批号：090510);复方丹参滴丸(天津天士力集团生产，批号：090112);细胞凋亡检测试剂盒(南京凯基生物工程科技发展有限公司提供，批号：090606);Bcl-2一抗、Bax一抗、即用型SABC试剂盒及DAB显色剂(武汉博士德生物工程有限公司提供)。　　1.3方法　　1.3.1建立模型采用结扎左冠状动脉前降支法建立大鼠急性心肌缺血模型[5]。先将所有大鼠测试心电图(标准Ⅱ导联)，心电图异常者剔除。选

5、取合格大鼠，乙醚麻醉，胸部备皮，常规消毒后，在切口周围做荷包缝合准备(以备关闭胸腔)，沿锁骨正中线行切开皮肤术，在第四或第五肋间钝性分离胸部肌肉，打开胸腔，剪开心包，挤出心脏。在动脉圆锥与左心耳之间以无创性缝合线结扎冠状动脉，速将心脏置回胸腔内，并迅速拉紧荷包缝合线，关闭胸腔，开胸时间不超过60s。以结扎处周围心肌变白、搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上抬高者为造模成功大鼠。术后给予青霉素20万U·kg-1，肌肉注射，防止感染。　　1.3.2分组及给药实验共分为6组：假手术组、模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低

6、剂量组，见表2。　　采用随机数字表法，选取10只大鼠作为假手术组(仅将无创性缝合线穿过左冠状动脉而不结扎，其余操作均同造模方法)。术后24h，再选取造模成功大鼠50只，随机分为5组，即模型组、阳性对照组、麝鼠香高、中、低剂量组，每组10只，各组大鼠灌胃给药。麝鼠香高、中、低剂量组生药浓度分别为600、300、150mg·kg-1·d-1，阳性对照组给予复方丹参滴丸450mg·kg-1·d-1，假手术组、模型组给予等体积的生理盐水，连续给药21d。　　1.3.3制备检测标本给药期结束，摘取大鼠心脏，置于冰盐水中洗涤

7、数次，除去血污，取结扎周围心肌缺血区约8mm×8mm×2mm心肌标本2块。标记后置于4%甲醛溶液中固定12h，常规石蜡包埋，以备细胞凋亡及Bcl-2、Bax检测。　　1.3.4心肌细胞凋亡情况及Bcl-2、Bax的测定　　采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。将石蜡包埋的心肌标本做5μm厚度切片，根据TUNEL试剂盒说明书进行标记染色，在显微镜(×400)下观察每个视野中的凋亡细胞数及细胞总数，每组共数10个视野。然后取其均值作为该组的代表值。计算公式为：凋亡指数(%)=(凋亡细胞数/细胞总数)×100%。判断标

8、准：凋亡的心肌细胞核内分布有棕褐色颗粒，体积等于或小于正常细胞核。　　采用链霉素亲合素-生物素-酶复合物(StreptAvidin-Biotin-enzymeplex，SABC)法，进行Bcl-2和Bax蛋白免疫组织化学检测。石蜡切片经微波修复抗原，二氨基联苯胺(DAB)染色，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片后，利用图像分析系统，进行显微摄像。以心肌细胞胞浆内出现棕