川芎嗪对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺泡中肿瘤坏死因子α的影响

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1、川芎嗪对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠肺泡中肿瘤坏死因子α的影响【摘要】目的探讨川芎嗪对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠肺泡中肿瘤坏死因子α（TNFα）的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组：正常对照组（对照组）、COPD模型组（模型组）、川芎嗪治疗组（川芎嗪组）每组8只。采用熏吸香烟并经气管内注入脂多糖（LPS）法建立大鼠COPD模型，川芎嗪组于COPD模型开始建立后第8天起每天腹腔注射川芎嗪注射液80mg/kg，至第28天。观察各组气道炎症病理特点，肺平均内衬间隔（MLI）和平均肺泡数（MAN），计数支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞总数

2、、多形核中性粒细胞（PMN）数及TNFα浓度。结果川芎嗪组肺组织形态学改变较模型组减轻；MLI较模型组降低，较对照组增高，而MAN与之相反，差异显著（均P＜0.05）。川芎嗪组BALF中白细胞总数、PMN数及TNFα浓度较模型组下降，差异非常显著（P＜0.01）；较对照组略升高，差异不显著（P＞0.05）。结论川芎嗪可降低COPD大鼠BALF中TNFα浓度，抑制炎症细胞生成，对COPD大鼠气道炎症具有明显的抑制作用。【关键词】川芎嗪；肿瘤坏死因子α；慢性阻塞性肺疾病；大鼠慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种具有气流受限特征的疾病，气流受限不完

3、全可逆、呈进行性发展，与肺部对有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关〔1〕，其发病机制尚未完全明了。目前普遍认为，COPD以气道、肺实质和肺血管的慢性炎症为特征，这种慢性气道炎症是由非常复杂的相互作用的细胞因子构成的网络调控的〔2〕。其中细胞因子肿瘤坏死因子α（TNFα）在COPD中的作用是近年研究的热点之一。研究表明，TNFα是具有多种免疫功能的调节因子，参与COPD气道炎症反应及气道结构的重塑。川芎嗪是活血化瘀药物川芎的提取物，主要成分是四甲基吡嗪，现代药理学研究表明〔3〕，川芎嗪能抑制炎性细胞在肺内聚集，抑制氧自由基的释放，起保护细胞、减

4、轻肺损伤的作用。同时阻止免疫复合物形成，抑制病菌生长，促进炎症吸收。川芎嗪对COPD气道炎症是否有效，国内外罕有报道。本实验选择熏吸香烟加气管内注射脂多糖（LPS）法〔4〕建立COPD大鼠模型，应用光镜、电镜观察COPD大鼠肺组织形态学变化，并测定川芎嗪治疗前后大鼠支气管肺泡灌洗液（BALF）中TNFα水平变化，气道炎症细胞数量变化，探讨川芎嗪对COPD大鼠气道炎症是否具有抑制作用，为临床应用川芎嗪治疗COPD提供实验依据。　　1材料与方法　　1.1材料健康SD大鼠24只，鼠龄4～8g，烟气烟碱量1.1mg）；LPS（美国Sigma公司）；TNF

5、α试剂盒（天津九鼎医学生物工程有限公司）；川芎嗪注射液（南京青泽医药科技开发有限公司）。　　1.2动物分组和模型建立健康SD大鼠24只，雌雄不限，随机分成3组，每组8只，正常对照组（对照组）：在正常环境下饲养，将大鼠于第1、14天气管内注入生理盐水0.2ml，第8天起每天腹腔注射生理盐水0.05ml/kg，至28天处死；COPD模型组（模型组）：将大鼠于第1、14天气管内注入LPS各200μg/200μl,第2～13天、5～28天在自制吸烟染毒箱（70cm×50cm×50cm，右上方带有1.5cm×1.5cm通气孔）内熏香烟2次/d，吸烟量为14

6、支/次，其中每次吸烟时间1h，两次吸烟间隔为1h。第8天起每天腹腔注射生理盐水0.05ml/kg，至第28天处死；川芎嗪治疗组（川芎嗪组）：气管内注入LPS及熏香烟过程同模型组，第8天起每天腹腔注射川芎嗪注射液80mg/kg，至第28天处死。　　1.3BALF的采集将大鼠用2%的戊巴比妥（25mg/kg）麻醉后仰卧固定于操作台,切开胸部，暴露出气管和双肺，结扎右主支气管，在隆突上用套管针穿刺至左肺，缓慢注入无菌生理盐水3ml，每次注入后立即回吸得到BALF,重复3次。灌洗液纱布过滤,回收率为60%～70%。吸取1ml该BALF到血细胞计数器上,计数

7、细胞总数及分类。余BALF4℃1500r/min离心10min,取其上清液置入EP管保存于-20℃冰箱中待检TNFα浓度。　　1.4TNFα的浓度检测应用TNFα检测试剂盒,按说明书用酶联免疫吸附实验(ELISA)测定TNFα的浓度。　　1.5病理标本制备和形态定量分析取每只大鼠的隆突上2～3mm处的气管及中叶肺组织5mm3大小，10％福尔马林固定，酒精梯度脱水，浸蜡，包埋，切片，HE染色，光镜观察。将经过4％戊二醛固定的1mm3右肺组织漂洗，用2％四氧化锇后固定，丙酮梯度脱水，包埋，聚合；切片，醋酸铀枸橼酸铅电子染色，透射电镜观察，并应

8、用显微微机图像处理系统，测量下列指标：①肺平均内衬间隔（MLI），其数值反映肺泡平均直径。②平均肺泡数（MAN），其数值