hplc法同时测定壮骨关节丸中3种有效成分的含量

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1、HPLC法同时测定壮骨关节丸中3种有效成分的含量作者：杨静,谭沛,潘桂湘,代志,郭锦明【摘要】目的建立同时测定壮骨关节丸中淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素含量的HPLC方法。方法采用ZorbaxSBC18(4.6mm×150mm,5μm)色谱柱；流动相：乙腈0.05%甲酸水溶液（梯度洗脱）；检测波长：0→8min为270nm，8→15min为246nm；流速：1.0mL/min；柱温为35℃。结果淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素分别在0.0223～0.713μg（r=0.9997）、0.0272～0.869μg（r=0.99

2、98）、0.0213～0.681μg（r=0.9998）范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均回收率分别为101.1%(RSD=3.27%)、97.66%(RSD=2.46%)、99.65%(RSD=2.13%)。结论该方法简便可行、重现性好、可作为壮骨关节丸的质量控制方法。【关键词】壮骨关节丸；淫羊藿苷；补骨脂素；异补骨脂素;梯度洗脱　　Abstract:ObjectiveToestablishanHPLC-VETTLERTOLEDOAX205（瑞士）十万分之一天平；BP121S万分之一天平（德国塞多利斯公司）；KQ250

3、E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司，频率40kHz，功率250m×150mm,5μm)；流动相：A为乙腈，B为0.05%甲酸水溶液，梯度洗脱（0min,30%A;10min,34%A;15min,65%A）；检测波长：0→8min为270nm，8→15min为246nm；流速为1.0mL/min；柱温为35℃；进样量：10μL。在此色谱条件下各成分分离良好，缺补骨脂和淫羊藿的阴性制剂对化合物的测定无干扰。对照品及供试品溶液色谱图见图1。　　2.2对照品贮备液的制备精密称取淫羊藿苷7.13mg、补骨脂素8.69mg、异补

4、骨脂素6.81mg，置同一10mL量瓶中，加入8mL甲醇超声溶解并定容至刻度，混匀，得混合对照品贮备液。　　2.3供试品溶液的制备取壮骨关节丸，研细，取约1.5g，精密称定，置25mL容量瓶中，加甲醇25mL，超声提取20min，放至室温，摇匀，过0.45μm微孔滤膜，取续滤液，即得。　　2.4阴性供试品溶液的制备取缺补骨脂、淫羊藿的阴性样品，按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备缺补骨脂、淫羊藿的阴性供试品溶液。　　2.5线性关系考察　　精密移取混合对照品贮备液1.0mL至10mL量瓶中，加入甲醇定容至刻度，摇匀。采用逐级

5、稀释法配制淫羊藿苷质量浓度为2.228、4.456、8.913、17.83、36.65、71.30μg/mL；补骨脂素质量浓度为2.716、5.431、10.86、21.73、43.45、86.90μg/mL；异补骨脂素质量浓度为2.128、4.256、8.513、17.03、34.05、68.10μg/mL的系列混合对照品溶液。在“2.1”项的色谱条件下进样10μL，测定峰面积。以各对照品浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）作线性回归，结果见表1。表1淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素的回归方程及线性范围（略）　　2.6精

6、密度试验取同一混合对照品溶液，连续进样6次，测定峰面积。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素峰RSD分别为0.38%、0.40%、0.41%，结果表明仪器的精密度良好。　　2.7稳定性试验取同一供试品溶液分别于0、2、4、6、8、10、12h进样10μL，测定峰面积。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素峰RSD分别为0.18%、0.29%、0.31%,表明供试品溶液在12h内基本稳定。　　2.8重现性试验取同一批号壮骨关节丸粉末（0707241），精密称定6份，按“2.3”项制备供试品溶液，依法测定，计算含量。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨

7、脂素含量分别为0.1863mg/g（RSD=3.32%）、0.2903mg/g（RSD=2.35%）和0.2293mg/g（RSD=2.24%），结果表明方法的重复性良好。　　2.9回收率试验取同一批号壮骨关节丸粉末（0707241），取约0.8g，精密称定6份，分别置25mL量瓶中，精密加入0.221mg/mL淫羊藿苷对照品溶液0.7mL，0.325mg/mL补骨脂素对照品溶液0.7mL，0.438mg/mL异补骨脂素对照品溶液0.4mL，按“2.3”项制备供试品溶液，依法测定，计算回收率。淫羊藿苷、补骨脂素和异补骨脂素平

8、均回收率分别为101.1%(RSD=3.27%)、97.66%(RSD=2.46%)、99.65%(RSD=2.13%)，结果见表2。表2加样回收率测定结果（略）　　3.10样品的测定取不同批号的壮骨关节丸，研细，取约1.5g，按“2.3”项制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下测定，