流式微珠阵列法检测ifn

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1、流式微珠阵列法检测IFN【摘要】本研究旨在探讨流式微珠阵列法检测Th1/Th2细胞因子表达及IFN-γ应用于T淋巴细胞白血病治疗的临床价值。以不同浓度IFN-γ诱导培养Jurkat细胞48小时，用流式微珠阵列法检测培养上清液中IL-2、IL-6、TNF-α和IFN-γ表达，并采用流式细胞术检测膜上IL-2受体（CD25）的表达。结果表明：IFN-γ诱导Jurkat细胞IL-2和TNF-α的表达呈浓度依赖性升高，未检测到IL-6表达，CD25表达明显升高。结论：Jurkat细胞能被IFN-γ诱导高表达Th1细胞因子和CD25，流式微珠阵列

2、法能准确客观地反映Th1/Th2细胞因子表达的动态变化。【关键词】T淋巴细胞白血病　　DetectionofExpressionofTh1/Th2CytokinesinJurkatcellTreatedetricBeadArray　　AbstractInordertoexplorethevalueofγ-interferon(IFN-γ)intherapyofTlymphoidleukemiaandroleofcytometricbeadarray(CBA)methodindetectionofTh1/Th2cytokinesexpre

3、ssion，theJurkatcellsethod;CD25expressionetry.Theresultsshoembranereceptor(CD25)，andtheCBAmethodcanbeusedtoexactlyevaluatethedynamicchangeofTh1/Th2cytokines.　　Keyetricbeadarray;Th1/Th2cytokine;IFN－γ;Tlymphoidleukemia流式微珠阵列（cytometricbeadarray，CBA）是近年来发展起来的新技术，可在一份标本中同时检测多

4、达10种细胞因子（IFN-γ、TNF-α、TNF-β、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10），具有快速、简便、准确的特点，而且灵敏度高（可达0.3pg/ml），可以准确反映Th1/Th2平衡状态［1-4］。有学者认为，IFN-γ可应用于T淋巴细胞白血病治疗，但目前为止并无确凿的实验证据。Jurkat细胞株为T淋巴瘤研究常用模型，因此本研究组以流式微珠阵列法检测IFN-γ诱导的Jurkat细胞Th1/Th2细胞因子表达，同时检测mIL-2R（IL-2膜上受体，CD25）表达，探讨IFN-γ的抗肿瘤效应及

5、作用机制。　　材料和方法　　材料　　RPMI1640液体培养基（杭州科达生物公司产品），临用前加入15%小牛血清（杭州四季青生物工程公司产品）；Jurkat细胞株（中国科学院上海细胞生物学研究所提供）；IFN-γ（上海克隆生物高技术有限公司生产）；流式微珠阵列细胞因子检测试剂盒（BenderMedsystems产品，Austria）；CD25FITC单克隆抗体（美国BectonDickinson公司产品）。细胞培养　　以含15%灭活小牛血清的完全RPMI1640培养液，于37℃、5%CO2、饱和湿度下培养Jurkat细胞，每2-3天换液

6、，取对数生长期的细胞进行实验。　　给药处理　　IFN-γ以完全RPMI1640培养液配成1×106U/ml　　贮存液，4℃避光保存。以1×106/ml浓度接种对数生长期细胞于6孔板中，培养6小时后给药。各孔药物终浓度分别为0(对照组)、1000、2000、4000、6000、10000U/ml，继续培养48小时，收集细胞用于CD25检测，细胞培养上清液用于细胞因子检测。　　IFN-γ、TNF-α、IL-6、IL-2的流式微珠阵列检测　　按试剂盒操作说明准备好检测缓冲液、微珠、生物素偶联剂和亲和素标记藻红蛋白（phycoerythrin，

7、PE)，以检测缓冲液预湿微孔板，加入不同浓度细胞因子标准品或25μl待测细胞培养上清液，同时每孔加入25μl微珠和50μl生物素偶联剂，室温振摇（500rpm）孵育2小时，真空吸干液体，充分洗涤2次，每孔加入100μl检测缓冲液和50μl亲和素标记PE，继续孵育1小时，真空吸干液体后洗涤2次，加入200μl检测缓冲液并转移到试管中，FACScan(BectonDickinson，USA)流式细胞仪测定荧光强度，荧光通道为FL-2，采用FloixPro分析软件（联科公司附赠）进行分析。　　药物处理48小时后Jurkat细胞CD25表达的流

8、式细胞术检测　　收集1×106细胞，用PBS洗涤1次后，加入CD25FITC单克隆抗体，孵育15分钟，充分洗涤后，FACScan流式细胞仪测定荧光强度，激发波长为408nm，采用Cellquest分析软件进