tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用

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1、Tim4基因定量检测方法的建立及在消化道肿瘤中的初步应用钱晖，彭秀娟，许晓蒙，顾红兵，王梅，徐会涛，陶洋，徐三荣，许文荣【摘要】目的：建立T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4(Tcellsimmunoglobulinandmucindomaincontainingmolecule4，Tim4)基因表达的实时荧光定量PCR(实时RTPCR)的检测方法，探讨Tim4基因在消化道肿瘤中的表达差异。方法：构建包含Tim4基因片段的标准质粒，通过RTPCR，实时RTPCR等检测并比较Tim4基因在

2、37例胃癌组织、19例结直肠癌组织与对应癌旁组织中的表达水平。结果：建立的Tim4基因定量检测方法准确可靠；在37例胃癌组织中，26例癌旁组织Tim4基因表达量高于对应癌组织(26/37)，且在26例癌旁组织高表达的样本中，18例（69.2%）胃癌癌旁组织与癌组织表达比率大于2；在19例结直肠癌中12例癌旁组织表达高于对应的癌组织(12/19)，其中癌旁组织高表达率（大于2）为75.0%(9/12)。结论：成功建立了检测Tim4基因的实时RTPCR方法，Tim4基因在结直肠癌和胃癌的癌组织中表

3、达呈低趋势，这为深入探讨Tim4基因与肿瘤的关系提供了实验基础。【关键词】T细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4；实时荧光定量RTPCR；胃癌；结直肠癌　　〔Abstract〕Objective:ToestablishamethodofrealtimeRTPCRforTcellsimmunoglobulinandmucindomaincontainingmolecule4(Tim4)andinvestigateitsexpressionincolorectalcancerandgastri

4、ccancer.Methods：ThestandardplasmidofTim4gene4inthetumortissuesof37patientsePCR.Results：ThestandardquantitativecurveofTim4geneeRTPCRforTim44geneinthegastriccancertissues(26/37)atchingadjacentnoncanceroustissues.TherateofhigherexpressionofTim4gene(&g

5、t;2)inadjacentnoncanceroustissues/gastriccancertissuesplesexpressionofTim4geneinthecolorectalcancertissuesof19patientsatchingadjacentnoncanceroustissues,therateofhigherexpressionofTim4gene(>2)inadjacentnoncanceroustissueseRTPCRhasbeensuccessfu

6、llyestablishedfordetectionofTim4geneexpression.ExpressionofTim4geneisloforTim4andcancerstudies.　　〔Keymunoglobulinandmucindomaincontainingmolecule4；realtimeRTPCR；gastriccancer；colorectalcancerT细胞免疫球蛋白及黏蛋白域分子4（Tcellsimmunoglobulinandmucindomain

7、containingmolecule4,Tim4）也称为Timd4，是有调节细胞免疫应答作用的Tim基因家族的成员〔1〕，主要表达于抗原递呈细胞,特别是成熟的树突状淋巴细胞，能与Tim1特异性结合而调节T细胞增殖〔2〕。近年研究显示，Tim4是磷脂酰丝氨酸的受体，能通过磷脂酰丝氨酸与细胞结合而促进凋亡细胞的吞噬作用〔3〕。由于Tim4与凋亡关系密切，这使我们关注其与干细胞及肿瘤的相关性，为此本研究在建立定量RTPCR检测Tim4基因表达的基础上，初步探讨该基因在结直肠癌和胃癌组织中的表达水平，

8、为深入探讨Tim4与肿瘤的相关性提供实验数据。1材料和方法1.1细胞与患者标本　　人脐带来源的间质干细胞（ucMSC），人胃癌细胞株（SGC7901）；胃癌标本37例，其中男23例，女14例，年龄44～75岁,中位年龄61岁。结直肠癌标本19例，其中男12例，女7例，年龄37～84岁,中位年龄63岁。所有病例取自2008年1月至2009年5月江苏大学附属人民医院和江苏大学附属医院外科收治并经病理组织学确诊的手术切除标本，术前均未接受化疗及放疗，所取患者标本皆为成对的癌组织和癌旁组织(距癌变部位