戊四氮诱导单次惊厥幼鼠海马碱性成纤维细胞生长因子表达的研究论文

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1、戊四氮诱导单次惊厥幼鼠海马碱性成纤维细胞生长因子表达的研究论文.freelpusofepilepticpedo-ratsatdifferenttimepointsandinvestigateitsbearingonepilepsy.MethodsForty-tlydividedintotodelgroup)andB(normalsalinegroup).Pentetrazoleodels.TheexpressionofbFGFinthehippocampusofratsmunofluorescentlabelingtechnique.H-Estainingorpholo

2、gicalstudy.ResultsIngroupA，neuronaldegenerationandnecrosisinthehippocampus，andcellularproliferationofglialcellsasostmarked1dayafterseizure(P0.01)，continuedtobehigherfor7days(P0.05)，andthendeclinedandapproachedthecontrollevel14dayslater(P0.05).ConclusionTheexpressionofbFGFinhippocampusof1

3、4-dayratisincreasedafteracuteepilepsy，significantlyhigherfor7daysafterseizure.bFGFmayplayanimportantroleintheself-plerosisafterbraininjuryinducedbyepilepsyinpedo-rats.Keypus碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrog/kg，逐个动物观察记录，行为分级标准依据Racine分级标准［4］分为5级。选择V级单次发作者（发作不超过30min）作为癫疒间研究模型。B组同时给予等体积生理盐水腹

4、腔注射。1.3灌注和取材10%水合氯醛(0.35ml/kg)腹腔注射麻醉，麻醉成功后剪开胸腹腔，暴露心脏和肝脏，用灌注针自心尖向上45度进针至主动脉起始段，剪破右心耳，先快速灌注生理盐水，接着用4%多聚甲醛先快速滴注，然后缓慢滴注直至大鼠四肢强直，肝脏变白后停止灌注，拔出穿刺针，剪开颅骨，取嗅脑至中脑之间的脑组织，放入4%多聚甲醛固定12h以上，然后进行石蜡包埋，切片取海马组织冠状位片，片厚6~7μm，每只大鼠取不连续部位脑片8~10张，分别进行HE染色和免疫组化观察。1.4免疫组化采用两步法免疫组化方法，试剂盒购自北京中杉金桥生物公司，一抗为1∶100兔抗大鼠bFGF

5、多克隆抗体，阴性对照用PBS取代一抗，显色剂用DAB和H2O2进行着色，操作步骤按试剂盒操作说明书进行，阳性细胞被染成棕褐色。1.5图像分析及统计学处理切片置于OlympusPM-CB显微镜下观察，在高倍镜下每张切片按齿状回、CA1、CA3区任选3个视野，计算阳性细胞数，取其平均数。数据由SPSS11.5统计软件处理，试验数据以x±s表示，2组间比较用t检验，多组比较采用单因素方差分析（ANOVA）进行分析。P0.05为差异有显著性。2结果2.1动物行为学观察A组：注射戊四氮后1~2min进入潜伏期，大鼠由自由活动状态逐渐转为安静或伏卧，随后出现眼神呆滞，头面部肌肉轻微

6、抽搐，出现湿狗样抖动并伴有须动、耳抖和搔抓动作，继而进入大发作期，渐次出现前肢阵挛、奔跑跳跃、后肢站立伴头偏向一侧及全身阵发性抽动;达到V级发作的动物则表现为摔倒、翻滚等全身强直-阵挛性发作，同时伴有喉鸣、口角流涎、肢端青紫等。整个发作持续约1~4min后逐渐缓解，若出现连续多次发作则被剔除。B组:注射生理盐水后无任何发作迹象和抽搐表现，行为正常。2.2病理形态学观察B组海马锥体细胞排列紧密、层次分明，细胞呈圆形或橢圆型，染色质在核内分布均匀，核仁清晰。A组1天：海马CA1区锥体细胞排列逐渐散乱，细胞肿胀，继之出现核固缩浓染、染色质浓集、细胞变小、细胞外出现空晕等改变。

7、A组7天：细胞排列散乱和细胞肿胀现象减轻，仍可见散在细胞胞质浓缩，并有少许鬼影细胞。A组14天：变性的神经细胞变为椭圆形或三角形，周围有小胶质细胞增生。2.3免疫组化结果A组bFGF阳性细胞胞质、胞核均有着色，胞核更为明显，呈圆形、椭圆形。造模后1天bFGF表达在齿状回、CA1和CA3区均显著增高(P0.01)，发作后7天有所下降，但仍高于B组(P0.05)，发作后14天bFGF表达下降，和B组无显著性差异(P0.05)（见表1，图1）。A组bFGF阳性细胞表达增加以CA1区最明显，齿状回和CA3区次之。B组各时间点海马bFGF表达一直维