关于神经内科癫痫病患者的临床分析观察

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1、关于神经内科癫痫病患者的临床分析观湖南省来阳市人民医院湖南衡阳421800摘要：目的研究神经内科癫痫病的临床发病机制。方法选择10只SD新生鼠海马组织为研究对象，构建新生鼠癫痫模型，测量不同浓度Munc-18抗体作用20小时或40小时对神经细胞的损害情况。结果与正常对照组比较，×200>×400Munc-18抗体（20及40小时）LDH释放量、凋亡指数明显更高，差异有统计学意义，P<0.05o另外×1000Munc-18抗体凋亡指数明品高于对照组，P<0.05。结论Munc-18蛋白可能是通过激活天冬氨酸、GluR

2、3等导致机体钙离子、钠离子内流，钾离子外流，进而产生毒性达到损害神经元的目的，最终引发癫痫疾病。另外Munc-18蛋白抗体自身的细胞毒性作用可能导致祌经元凋亡。。关键词：Munc-18蛋白；癫痫性脑病；发病机制；作用近年来相关研究表明Munc-18蛋白（神经突触前膜胞内蛋白）在神经递质中起一定的作用，且利用血浆置换方式降低患者体内Munc-18抗体浓度后，患者癫痫发作次数较之前明显减少［1-2］。木研究就此通过构建新生鼠海马癫痫性脑病模型探讨Munc-18蛋白在婴儿癫痫性脑病发病机制中的作用，报告如下。1资料与方法1.1材料与试剂选择10只SD新生鼠

3、为研究对象，岀生时间在1天至3天之间，平均（1.5±0.5）天，体重在4克至8克，平均（5.4±0.3）克。仪器设备：包括恒温培养箱、自动干热消毒柜、显微镜、细胞培养瓶、外科手术器材等。主要试剂：Munc-18抗体、乳酸脱氢酶试剂、二甲亚砜等。严格按照仪器设备及试剂使用说明书操作。1.2方法（1）海马祌经细胞培养。将10只SD新生鼠用酒精（浓度75%）浸泡2至3分钟消毒后取脑，无菌操作。利用外科手术器材把海马皮层奋效分离后将其放置到解剖液中，显微镜下把大血管、脑膜去掉，将剩余的剪成0.5立方毫米的小块，随后利用胰酶（浓度0

4、.125%,温度27摄氏度）消化25分钟左右，接着用DMEM种植液（含奋20%小牛血清）终止消化。经相应处理后利用不锈钢滤网将其制作成细胞悬液，然后再次利用DMEM种植液将其浓度调整为l×106·ml-l,并将其接种到之间准备的96孔培养板（上面涂冇0.1mg·ml-l的多聚左旋赖氨酸）上，1个孔100微升，接着将培养板放在培养箱中培养（温度37摄氏度、二氧化碳浓度5%），24小吋后利用Neurobasal/B27培养液代替DMEM种植液，共培养1个星期［3-4］。（2）把培养后的海马细胞抽签分为两组，均滴入不

5、冋浓度（稀释×200，×400,×1000）的Munc-18抗体与同容积的培养液，A组Munc-18抗体作用20小时，B组Munc-18蛋白作用40小时。两组均行细胞存活率、LDH释放量、TUNEL染色等测定。（3）相关指标测定。①细胞存活率。Munc-18抗体作用后，停止培养前4小吋在96孔培养板中加入MTT磷酸缓冲液（10微升，浓度为每毫升0.5毫克），让其在培养箱中继续培养。4小时后把上清液去掉，放入二甲亚砜（200微升）停止反应。利用酶标仪测定出光密度，波长570纳米。细胞存活率为孔中光密度与对照组光密度比

6、值［5-6］。②TUNEL染色。把培养后的细胞悬液连接到12孔培养板中，每个孔中加入500微升的培养液，方法同海马神经细胞培养过程。Munc-18蛋白作用后进行染色，根据试剂盒使用说明书执行。随后用显微镜观察细胞是否凋亡：神经元核呈现棕褐色，核周染色质为月牙状或块状，提示细胞凋亡。1.3统计学方法应用SPSS16.0统计学软件对上述数据进行分析，计量资料均数±标准差表示，t检验，P<0.05吋差异宵统计学意义。2结果不同浓度Munc-18抗体作用20小吋/40小吋对神经细胞的损害情况具体情况见表1、表2。与正常对照组比较，×

7、200、×400Munc-18抗体（20及40小时）LDH释放量、凋亡指数明显更高,差异有统计学意义,P<0.05o另外×1000Munc-18抗体凋亡指数明显高于对照组，P<0.05。3讨论婴儿癲痫病脑病具有发病年龄小、预后差等特点，主要表现为阵挛、精神运动障碍(语言障碍、肢体偏瘫等)，严重影响婴儿的正常发育［7］。0前临床上婴儿癫痫病脑病发病机制尚不明确，但很多学者认为与癫痫家族史、孕妇妊娠严重中毒、神经递质、免疫系统异常等冇关［8-9］。相关研究表明长时间癫痫发作可能破坏婴儿血脑屏障，导致婴儿中枢神经系统中的部分组织成为

8、异种抗原体,通过免疫反应产生自身抗体［10］。由于神经细胞损伤主要由坏死或凋亡引起，Smeyne等人研究表现