怀牛膝总皂苷对oxldl诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响

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1、怀牛膝总皂苷对oxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖与迁移的影响作者：邹小明周大兴丁志山蒋福升施宏余佳文【摘要】［目的］探讨怀牛膝总皂苷（ABS）大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响，阐明其抗动脉粥样硬化的机制。［方法］采用oxLDL诱导大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的方法，采用MTT法测定VSMC增殖，采用伤口愈合法测定VSMC迁移能力，观察ABS对oxLDL诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖、迁移的影响。［结果］oxLDL浓度为30mg/L促进VSMC增殖最强；ABS（50、100、150mg/L）

2、显著抑制oxLDL诱导的VSMC增殖，作用呈浓度依赖性；ABS（20mg/L）显著抑制oxLDL诱导的VSMC迁移。［结论］ABS能抑制oxLDL诱导的VSMC增殖与迁移，说明其具有抑制血管内膜增厚和斑块形成的作用。【关键词】怀牛膝总皂苷；oxLDL；血管平滑肌细胞；增殖；迁移　　Abstract：［Objective］ToinvestigatetheinfluenceofAchyranthesbidentatasaponins（ABS）ontheproliferationandmigra

3、tionofratsaortavascularsmoothmusclecells，andtoelucidateitsmechanismofantiatherosclerosis.［Methods］Theoxidizedlooothmusclecells（VSMC）andMethylthiazolyltetrazolium（MTT）assayinethegro，inetheinfluenceofABSontheabilitytomigrateofVSMC.AllmethodsigrationofV

4、SMCinducedbyoxLDL.［Result］TheproliferationofVSMCg/L，andthiseffectofoxLDLcouldbesignificantlyinhibitedbyABS（50,100,150mg/L）inaconcentrationdependentmanner;ABScouldalsoinhibitthemigrationofVSMCinducedbyoxLDLat30mg/L.［Conclusion］ABScouldinhibitthepro

5、liferationandmigrationofVSMCinducedbyoxLDL.Fromtheseresults，itappearsthatABScanreducethethicknessofvascularintimaandinhibitthedevelopmentofvascularplaque.　　Keyoothmusclecells;proliferation;migration　　动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的发病机理有许多学说，但以氧化损伤学说研究最多［

6、1］。氧化修饰LDL（oxLDL）能促进泡沫细胞形成及血管平滑肌细胞增殖和迁移，导致动脉粥样硬化［2］。本研究采用中医临床治疗心血管疾病的常用药物怀牛膝，观察其对oxLDL诱导的VSMC增殖和迁移的影响，报道如下。　　1材料和方法　　1.1材料　　怀牛膝总皂苷（浙江中医药大学化学教研室提供），SD大鼠（浙江中医药大学动物实验中心提供），人血浆（购自浙江省血液中心），胎牛血清（杭州四季青生物工程材料研究所），DMEM（美国GIBCOBRL公司），胰蛋白酶（杭州宏博生物工程有限公司Amresco分

7、装），MTT（华美生物工程公司），二甲基亚砜（浙江杭州双林化工试剂厂），其余试剂为国产分析纯试剂，超速离心机（日本Hitachi公司），荧光倒置显微镜（日本OLYMPUS公司），UV754紫外分光光度仪（上海分析仪器总厂），HEPACLASS100型细胞CO2培养箱（美国THERMO公司），SEM培养基中，置于37℃、5%CO2孵箱中静置培养。待细胞铺满培养瓶底达80%时，用0.15%胰酶和0.02%EDTA消化，进行传代培养，传代比例为1∶2，传代周期为4～5d。选生长良好的第5～10代传代细

8、胞用于以下实验。　　1.2.3确定oxLDL诱导的VSMC生长的最佳浓度　　取对数生长期的细胞以每孔6000个细胞接种于96孔板中，每孔200μl，分7组，每组6个孔。用含10%FBS的DMEM培养一天后，换用无血清DMFM培养，次日各组换用含5%FBS的DMEM并分别处理如下：第1组不加oxLDL；其余各组加oxLDL，终浓度分别为10，20，30，40，50，60mg/L，24h后加入5mg/mlMTT，每孔20μL，置37℃，5%CO2培养箱中培养4h后取出，加入二甲基