蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响论文

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1、蓖麻油甾醇组成及其对大鼠蜕膜细胞的影响论文张小雪段双全韩峰高平刘世贵【摘要】目的进一步探明蓖麻油中的抗生育物质成分。方法利用皂化和萃取,从蓖麻油中提取甾醇,用GC-MS分析蓖麻油甾醇成分；用MTT法检测蓖麻油甾醇对原代培养大鼠蜕膜细胞活力的影响。结果蓖麻油总甾醇的主要成分为γ-谷甾醇（43.02%）、豆甾醇（27.15%）、岩藻甾醇（11.43%）、麦角甾-5-稀-3-醇（6.00%）和普罗布考（7.46%）。蓖麻油甾醇对细胞活力有抑制作用，其半抑制剂（IC50）剂量为：(88.45±3.196)μg/ml,r=+0.9549；抑制作用具

2、有量-效关系。结论在蓖麻油甾醇的主要成分中，γ-谷甾醇（r-Sitosterol）可能是抑制原代培养大鼠蜕膜细胞活力的主要成分，而豆甾醇（stigmasterol）可能起协助的作用。【关键词】蓖麻油甾醇原代培养大鼠蜕膜细胞气相色谱-质谱联用分析四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法Abstract：ObjectiveToassaytheconstituentsofphytosterolofcastorbeanseedoilandtheinhibitionontheviabilityofprimaryculturedratdecidualstorm

3、alcells(DSC).MethodsThemethodsofGC-MSanalysisandMTTmethodainconstituentsofphytosterolofcastorbeanseedoilasterol(27.15%),Fucosterol(11.43%),Probucol(7.46%)andErgost-5-en-3-ol(6.00%);thephytosterolpossessedinhibitoryactivityontheviabilityofprimaryculturedratDSCinadosedepend

4、entmanner.TheIC50l,r=+0.9549.ConclusionTheγ-SitosterolmayactasthemaincontributorintheinhibitionontheviabilityofDSC，andtheStigmasterolmightactasanassistant.Keyaryculturedratdecidualstormalcells;GC-MSanalysis;MTTmethod蓖麻RicinusmunisL.为大戟科一年生或多年生草本植物，原产于非洲，我国各地均有栽培。蓖麻不仅是著名的油

5、料作物，而且是重要的中药材。在我国.freelin离心30min(0℃)；弃沉淀，留上清，挥发除去乙醇得乙醇提取物。此提取物用乙醚在50℃条件下索式提取24h，挥发除去乙醚后即得蓖麻油。取60g蓖麻油，用600mlKOH乙醇溶液(1M)皂化1h(100℃)，趁热加入600mlddH2O，冷却后用乙醚萃取4次，合并萃取液，用480mlddH2O清洗，共清洗4次，直到萃取液为中性。挥发除去乙醚，用600mlddH2O重悬未挥发部分，每次用1200ml乙醚重新萃取不皂化物，重复萃取4次以除去残余皂化物；挥发去除溶剂即得淡黄色半固体物质，即蓖麻油

6、不皂化物（得率1.135%）。用丙酮萃取除去丙酮不溶物，挥去丙酮，用95%乙醇室温下清洗除去黄色油状物，得白色晶体，即蓖麻油总甾醇（得率0.470%）。用于体外培养大鼠蜕膜细胞活力抑制实验的蓖麻油甾醇与吐温-80按1∶1在研钵内混匀，再滴加于生理盐水中，配制成10mg/ml的处理母液；将母液磁力搅拌30min，无菌过滤后4℃保存备用。同法配制吐温-80生理盐水溶液作为阴性对照，米非司酮为阳性对照。1.2仪器设备和试剂气相色谱-质谱联用仪（QP2010型，日本，岛津）；手提式压力蒸气灭菌锅（申安医疗器械厂）；二氧化碳培养箱（311型,The

7、rmo，USA），超净工作台（STT和DMSO（Sigma公司），青霉素（华北制药有限公司），庆大霉素（西南药液股份有限公司），DMEM/F12(1∶1)培养基(Gibco，Invitrogen公司)，小牛血清（成都哈里）。1.3大鼠蜕膜细胞的培养取妊娠15dSD大鼠乙醚麻醉，去毛后断颈处死。75%酒精将大鼠整体消毒后放入超净台内，分别用碘酒、75%酒精消毒腹部皮肤和肌肉，迅速剪下子宫，放入盛有4℃D-Hanks液无菌培养皿中洗去血污。剪开子宫，分离出胚胎后用无菌载玻片刮取子宫蜕膜组织，并将蜕膜组织放入无菌小瓶中剪碎。加入适当量0.25%

8、胰蛋白酶液，37℃温浴30min，然后加入含10%小牛血清的DMEM/F12培养液停止消化。用带5号针头的注射器吸取单细胞液，1000r/min离心10min；用含10%小牛血清DMEM/F1