阿司匹林联合脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响论文

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1、阿司匹林联合脑缺血预处理对大鼠脑缺血再灌注后炎性反应的影响论文.freelin，再灌注3d后给予2hMCAO；ASA治疗组，于缺血预处理10min即开始给药，ASA60mg·kg-1·d-1溶于2ml生理盐水中，灌胃，3d后再次造成2hMCAO。BIP组和ASA治疗组均按缺血2h后分别再灌注6、24h分为2个亚组，每个亚组动物均为10只。脑缺血再灌注组和BIP组予等量生理盐水灌胃。1.2缺血预处理及缺血再灌注模型制作采用文献〔4〕法并加以改进。再灌注3d后用相同方法再次造成MCAO2h，于各相应时间点进行神经功能

2、缺失评分，心脏取血，后断头处死。以动物清醒后爬行时向右转圈(追尾现象)，严重时向右跌倒，提尾时右前肢内收屈曲，且一直存活到规定时间点为造模成功标志。假手术仅暴露颈总动脉及分叉处，不插线阻断大脑中动脉。各组动物术中均用白炽灯使其肛温维持在37℃左右。1.3指标检测及方法1.3.1神经功能缺失评分按Longa等〔4〕的5级评分法评分：0级，无功能障碍；1级,不能伸展右侧前肢；2级，向右侧旋转；3级，向右侧倾倒；4级，无自主活动伴意识丧失。1.3.2血清神经元烯醇化酶(NSE)的测定神经功能缺失评分完毕后，取心脏血2m

3、l，离心后取血清，置-20℃冰箱内保存，整批待测。1.3.3脑梗死体积测定取血完毕后，每组各随机选取5只动物，以10%的水合氯醛深麻醉后处死，取左侧大脑半球，冠状面均匀切成2mm厚脑片，迅速放入2%的2,3,5三苯基氯化四氮唑溶液(37℃)中染色30min，然后用10%的甲醛缓冲液固定。24h后照相测每个层面梗死灶面积，将各脑片梗死面积之和乘以厚度(2mm)为总的梗死体积。1.3.4脑组织白细胞介素1β(IL1β)、肿瘤坏死因子α(TNFα)含量测定每组另外5只动物用10%的水合氯醛深麻醉后处死，迅速取

4、出鼠脑，剥离左侧皮质，称重后按400mg∶1ml加生理盐水制脑组织匀浆，匀浆液3000r/min低温离心15min，取上清液置-20℃冰箱内待测。后采用FTDFγ晶体闪烁计数仪(北京核仪器厂生产)，测定脑组织IL1β和TNFα的含量。试剂盒均由解放军总医院科技开发中心放免所提供。1.4统计学处理数据用x±s表示，用SPSS10.0统计软件处理，多组比较进行方差分析及两两比较q检验，两组间比较采用t或t′检验。2结果2.1神经功能缺失评分假手术组无神经功能缺失表现。BIP组、ASA治疗组神经功能缺失评分与相

5、应时间点的缺血再灌注组比较有显著性差异(P0.01)。ASA治疗组神经功能缺失评分明显降低，与BIP组比较差异显著(P0.01)，见表1。表1各组脑缺血再灌注后不同时间点神经功能缺失评分的比较(略)2.2血清NSE含量脑缺血再灌注组各个时间点血清NSE含量，与相应时间点的假手术组比较明显升高(P0.05)。BIP组、ASA治疗组与相应时间点的脑缺血再灌注组比较血清NSE含量降低(P0.01)。ASA治疗组与BIP组比较血清NSE含量降低(P0.01)，见表2。2.3脑梗死体积假手术组无肉眼可见的梗死灶形成。脑缺血

6、再灌注组梗死体积6h为(175.78±19.33)mm3，24h为(179.37±16.96)mm3。BIP组梗死体积6h为(96.15±21.16)mm3，24h为(99.36±18.95)mm3。ASA治疗组梗死体积6h为(63.55±17.56)mm3，24h为(67.44±23.04)mm3。BIP组、ASA治疗组与相应时间点的脑缺血再灌注组比较梗死体积明显缩小(P0.01)。ASA治疗组与BIP组比较梗死体积缩小更加明显(P0.05)。表2各组脑缺血再灌注后不同时间点血清NSE含量的比较(略)2.4脑组

7、织IL1β和TNFα含量脑缺血再灌注6h病变侧脑组织IL1β和TNFα含量达到高峰，之后略有下降。脑缺血再灌注组各个时间点脑组织IL1β和TNFα含量较假手术组明显增高(P0.01)。BIP组、ASA治疗组与相应时间点的脑缺血再灌注组比较病变侧脑组织IL1β和TNFα含量降低，并有显著性差异(P0.05)。ASA治疗组与BIP组比较病变侧脑组织IL1β和TNFα含量降低(P0.05)，见表3。表3各组脑缺血再灌注后不同时间点脑组织IL1β、TNFα含量的比较(略)3讨论脑缺血后的再灌注往往

8、引起较缺血本身更为严重的损害。再灌注损伤的病理特征主要为中性粒细胞浸润。在某些动物实验中应用抗中性粒细胞抗体使中性粒细胞减少，能使受损部位的面积缩小，提示在再灌注损伤中，中性粒细胞为主要的介导因素，各种炎症因子的释放起着重要的作用〔5〕。脑缺血再灌注后，损伤区内皮细胞、神经元、星形细胞和血管周围的炎性细胞即被激活，通过释放两种关键的细胞因子(IL1β和TNFα)而触发