119例慢性髓细胞白血病急变期核型分析论文

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1、119例慢性髓细胞白血病急变期核型分析论文朱雨，李建勇，潘金兰，吴炜，仇海荣，吴亚芳，杨慧，张建富.freeliaatBlastCrisisDepartmentofHematology,TheFirstAffiliatedHospitalofNanjingMedicalUniversity,JiangsuProvincePeopleHospital,Nanjing210029,China;1TheFirstAffiliatedHospitalofSoochoatology,Suzhou215006,ChinaAbstractToinvestigatethekaryotypeofchro

2、nicmyeloidleukemiainblastcrisis(CML-BC),karyotypeanalysisedosome9deletionsinrandomlyselected28casesofthem.Theresultsshoplevarianttranslocationand5cases(4.0%)osomalabnormalities,.freelostmononesbeingi(17q)and+14.72.3%ofPhpositiveCML-BChadextracytogeicchangesand+Ph,+8,i(17q)ostfrequent.Theaveraget

3、imebetonths(range2to66months)forPhnegativecasesand34.2months(range1to127months)forPhpositivecases.5cases(5/28,17.9%)osomalabnormalitiesaremoninCML-BCpatientsandFISHcaneffectivelydetecttheder(9)deletions.keyyeloidleukemia;CML-BC;karyotypeanalysis;derivativechromosome9deletion慢性髓细胞白血病（CML）是一种起源于多能

4、造血干细胞的血液系统恶性疾病，占白血病总数的15%-25%，Ph染色体被认为是CML的特异性标志。在临床上患者一般在确诊2-5年内由慢性期进展到急变期（blastcrisis,BC），慢性期时对化疗反应良好，进入急变期后化疗有效率不超过30%，生存期短，预后极差。CML病程中出现新的染色体异常克隆预示急变已得到广泛认可，进入急变期后附加染色体出现频率高、种类多，本研究对119例进入急变期的CML患者的核型进行了分析。材料和方法病例来源119例CML-BC患者，其中男85例，女34例，男女比为2.5∶1，中位年龄40.6岁。CML诊断及分期标准参照张之南主编的《血液病诊断及疗效标准》（第

5、二版）［1］。所有119例患者均行常规核型分析，其中随机选取28例标本作荧光原位杂交（FISH），以检测是否有衍生9号染色体［der(9)］缺失，取5例正常人骨髓作对照。核型分析119例患者中有5例在CML-BC期做了2次染色体检查，共有124例次核型资料，其中51例核型变化资料为定期复诊患者从初发病到急变及继续治疗后的核型变化资料。在上述51例中4例急变后行异基因造血干细胞移植。全部病例均采用直接法及不加植物血凝素的短期培养法制备染色体标本，然后采用改良的热处理姬姆萨R显带技术分析20-40个分裂中期细胞核型，并参照《人类细胞遗传学国际命名体制［IS(1995)］》加以描述［2］。荧

6、光原位杂交取出-20℃冰箱内保存的R显带后细胞,换用新鲜的甲醇/冰醋酸（3∶1）固定液，气干法滴片，在普通光学显微镜下找到中期细胞。37℃2×SSC中老化30分钟，依次以70%、85%、100%的乙醇梯度脱水，每梯度2分钟。72℃甲酰胺中变性2分钟，再70%、85%、100%冰乙醇梯度脱水，每梯度2分钟，晾干。暗环境中取BCR-ABL双色双融合DNA易位探针1.0μl(美国Vysis公司产品)、双蒸馏水2.0μl、杂交稀释液7.0μl于Eppendorf管中，离心、混匀，72℃水浴变性5分钟。每杂交区加10μl上述反应液，盖上玻片并封胶4周。标本置于湿盒杂交16-18小时（37℃）。杂

7、交后移去盖玻片，72℃0.3%triton/0.4×SSC洗液中洗2分钟，再于0.1%triton/2×SSC中洗1分钟。晾干后每杂交区加6μlDAPIII，盖上玻片，暗盒中复染45-60分钟。LeicaDMRA2荧光显微镜在DAPI/FITC/TexasRed三色滤光镜激发间期细胞荧光杂交信号：绿色荧光信号为BCR及（或）其断裂信号，桔红色荧光信号为ABL及（或）其断裂信号，黄色为融合信号。每例计数500个间期细胞，不计数重叠细胞。典型t(9