苦丁茶冬青叶多糖的提取及含量测定

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1、苦丁茶冬青叶多糖的提取及含量测定【关键词】苦丁茶冬青叶多糖；,,提取；,,苯酚　　摘要：目的研究苦丁茶冬青叶多糖含量的测定方法。方法以水提醇沉的方法从苦丁茶冬青叶中提取得到苦丁茶冬青叶多糖并以正交实验优化显色条件，采用苯酚-硫酸法测定其多糖含量。结果测定波长为482nm，最佳显色条件为6%苯酚用量1.0ml，浓硫酸用量7.0ml，反应时间40min。标准曲线回归方程为A＝0.0546C-0.0033（n＝10），r＝0.9998，并在2.51～45.11mg・L1范围内呈良好线性关系。平均回收率为98.55％，RSD＝1.8

2、6％（n＝5）。测得多糖平均含量为31.90％，RSD＝1.75％（n＝6）。结论该方法简单、准确、重现性好，可为其继续研究开发及应用提供参考依据。　　关键词：苦丁茶冬青叶多糖；提取；苯酚硫酸法；含量测定；正交实验　　ExtractionandDeterminationofthePolysaccharidesfromtheLeavesofIlexkudinchaC.J.Tseng　　Abstract：ObjectiveTostudythedeterminationmethodforpolysaccharidesintheleavesofI

3、lexkudinchaC.J.Tseng.MethodsTheleavesofIlexkudinchaC.J.TsengesbySevagmethod,andfrometricmethodappliedforthedeterminationofpolysaccharidesfromtheleavesofIlexkudinchaC.J.Tsengizedbyorthogonalexperiment.ResultsTheresultsshoeasurement.Thebestcolorimetricconditionseofreactiono

4、f40minandthedosageof6%phenylhydrateandH2SO4of1.0and7.0ml,respectively.Linearrangeg・L1(A＝0.0546C-0.0033，r＝0.9998).Theaveragerecoveryethodusedinthispaperissimple,accurateandstable.Theresultobtainedmayactasabaseforthefurtherstudyandapplicationofit.　　KeytheleavesofIlex

5、kudinchaC.J.Tseng;Extraction；Phenylhydrate-sulfuricacidmethod；Determination；Orthogonalexperiment　　苦丁茶冬青IlexkudinchaC.J.Tseng是冬青科（Aquifoliaceae）冬青属乔木植物，主产于湖南、湖北、广东、广西、海南等省。叶（苦丁茶）苦、甘、凉。清热解毒，祛暑。主要用于治疗头痛、齿痛、目赤、热病烦渴、痢疾等症［1］。近年来，已有人对苦丁茶冬青叶（苦丁茶）的化学成分和药理作用作了一些研究，为其临床应用提供了一定的理论依据［

6、2］。迄今为止，对其具有生物活性的多糖成分研究未见报道。本文首次从苦丁茶冬青叶中分离提取得到粗多糖，并以正交设计L9（33）优化显色条件，研究了苯酚-硫酸法测定苦丁茶冬青叶多糖含量的方法，为其进一步研究开发与应用提供了参考依据。　　1仪器与材料　　1.1原料苦丁茶冬青叶水提物精粉。苦丁茶冬青叶由海南澄迈万昌苦丁茶场提供，经晾干、粉碎后，用水于80℃浸提，提取液经浓缩后喷雾干燥得红棕色粉末，密封保存备用。　　1.2仪器紫外可见吸收光谱仪（UV2501PC，日本岛津公司）；真空干燥箱（8764S型，上海锦屏仪器仪表有限公司）；低速离心机（CL

7、12，新专红旗电机厂）；循环水式多用真空泵（SHBⅢ，郑州长城科工贸有限公司）。　　1.3试剂苯酚（AR，郑州市德众化学试剂厂），使用前重蒸馏；无水乙醇、无水乙醚、95％乙醇、三氯甲烷、正丁醇、硫酸等均为国产分析纯试剂，使用前未处理。　　2结果　　2.1多糖的提取［3,4］称取苦丁茶冬青叶水提物喷雾干燥粉末10g，加入95％乙醇200ml浸泡过夜，抽滤，取滤渣重复以上操作直至乙醇液无色时止。80℃烘干，加入去离子水200ml溶解，过滤除去不溶物质。向滤液中加入95％乙醇至含醇量达到80％，边加边搅拌，得灰白色絮状沉淀。静置6h后进行离心分

8、离沉淀，回收上层乙醇溶液，取固体部分再重复溶解、沉淀、离心分离操作至乙醇液澄清无色为止。溶解后，将体积比4∶1的三氯甲烷/正丁醇混合液等体积加入多糖溶液中，振荡30min后，静置，除去中间层变