植物组培快繁程序

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1、第三章植物组培快繁程序植物快速繁殖就是应用组织培养技术,快速繁殖名优特新品物，使其在较短时间内繁衍较多的植株。快繁是当前植物细胞组织培养中应用最广泛，又最有效的方法之一。一、供体植株的培养与取材二、外植体的灭菌与接种三、培养四、驯化移栽五、组培快繁计划安排与实施主要内容一、供体植株的培养与取材一般来说，无论何种类型的细胞组织培养技术，起始阶段均涉及外植体取材、灭菌与接种培养等基本过程。外植体来源的环境以及外植体的类型，均会影响将来培养的效果，而灭菌、接种和培养条件的选择与控制，也与外植体的来源和类型有关。1

2、、外植体的来源-生长在自然环境下的植物-有目的地培育在温室控制条件下生长的植物-无菌环境下已经过离体培养的植物自然环境中生长的植株，一般带有微生物，甚至与某些微生物具有寄生关系，使植株具有内生菌。取自这些植物的外植体，在培养过程中会有微生物滋生，从而影响培养效果。自然环境生长植株温室控制条件下生长植株已离体培养植株在多数情况下，应尽量使用温室或人工气候室控制培养的植物材料作为外植体来源，减少培养过程中的微生物感染概率。同时，生长在控制条件下的植物可以保持培养材料间的一致性，提高实验的可重复性，也便于培养技术

3、的规范。某些多年生植物或特殊材料，必须取自自然生长的植物，就需要尽可能避免使用那些生长过于潮湿和不洁净环境中的植物。对于培养过程中可能出现内生菌污染的材料，应尽量取生长旺盛期的生长点部位作为起始培养的材料。2、供体植株的管理取自室外的外植体材料，供体植株的管理十分重要，这与外植体培养时的污染率密切相关。植株管理中应注意：⑴避免昆虫危害许多昆虫如蚜虫、螨类和飞虱是许多植物病虫害的传播媒介，会引起植物组织的潜在感染。⑵注意防病尤其是真菌和细菌病害的侵染，取自感病植株的外植体，在培养中的污染率远远高于来自健康植株

4、的外植体，必要时需使用化学药剂防治病害。⑶控制湿度给供体植株浇水时应从根部给水，避免从上部浇水，以免上部形成易于病原侵染的湿度环境；尽可能降低温室湿度；取材前尽可能保持植株干爽。3、材料取材⑴材料选择培养材料应选择有代表性的主要植物、选择性状优良的种质或特殊的基因型。快速繁殖时应在植株生长的最适时期取材，如花药培养应在花粉发育到单核期取材。⑵取材从生长健壮的无病虫害的植株上选取发育正常的器官和组织。最好采用茎尖，后代性状较稳定，携带细菌较少。选取材料的大小一般在0.5-1.0cm之间。胚胎培养或脱毒在0.5

5、cm以下。材料太大易污染，材料太小难于成活。1、预处理先对植物材料进行修剪整理，去掉不需要部分，将准备使用的植物材料（外植体）在流水中冲洗20-60分钟，备用。如特别不洁的外植体，可先用加有洗涤剂的水清洗10-15分钟，再用流水冲洗干净。二、外植体的灭菌与接种2、表面灭菌（1）操作人员穿戴灭过菌的工作服、口罩。进入接种室前双手用洗涤剂清洗干净，操作前再用70%酒精或消毒剂擦洗双手。（2）操作期间双手和台面常用70%酒精或消毒剂擦拭。超净工作台使用前必须用紫外灯照射杀菌，然后开启风机。（3）接种用工具（解剖刀

6、、剪刀、镊子）可放入70-75%酒精中，使用时需火焰灼烧灭菌，冷却后使用。（4）外植体放入超净工作台内，置70-75%酒精中5-60秒，0.1％氯化汞6-10分钟，或10%的漂白粉上清液中10-15分钟，然后用无菌水冲洗3-5次。灭菌时需进行搅动。常用灭菌药剂的使用和效果灭菌剂使用浓度（%）清除的难易消毒时间效果次氯酸钠9—10易5—30很好次氯酸钙2易5—30很好漂白粉饱和浓度易5—30很好氯化汞0.1—1较难2—10最好酒精70—75易0.2—2好过氧化氢10—12最易5—15好溴水1—2易2—10很好

7、硝酸银1较难5—30好抗菌素4—50mg/L中30—60较好（1）材料吸干后，一手拿镊子，一手拿剪子或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm见方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含l—2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。（2）解开包口纸，将培养瓶口几乎水平拿着，避免灰尘落入瓶中。使瓶囗靠近酒精灯火焰，并将瓶口在火焰上方转动，使管口里外灼烧数秒钟。3、外植体的接种（3）迅速用镊子夹取切割分离下的所需组织、细胞、器官，送入培养容器内，轻轻插入培养基。若是叶

8、片直接附在培养基上，以放1—3块为宜。接完种后，将管口在火焰上再灼烧数秒钟。然后及时盖上瓶盖或封口。注意：所有操作均应严格保持瓶口在操作区以内，且不远离酒精灯；工具用后应及时灭菌，避免交叉污染；工作人员操作时禁止不必要的谈话。三、培养指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件)里，使之生长，分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。1、培养含义2、培养方法(1)固体培养法即用琼脂固化培养基来培养植物材