氨溴索对环丙沙星透过铜绿假单胞菌生物膜的影响

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1、氨溴索对环丙沙星透过铜绿假单胞菌生物膜的影响作者：杨华余加林刘官信陈波曼【摘要】目的研究氨溴索对环丙沙星透过铜绿假单胞菌生物膜的影响。方法孔径为0.22μm的医用微孔滤膜建立铜绿假单胞菌生物膜的体外模型；用高效液相色谱(HPLC)方法测定环丙沙星透过生物膜的量，并测定在2和0.75mg/ml氨溴索作用后环丙沙星透过细菌生物膜的量。结果经过7d的连续培养后，铜绿假单胞菌可在微孔滤膜上形成均匀致密的生物膜。环丙沙星可缓慢透过细菌生物膜，8h左右达到平衡；2和0.75mg/ml氨溴索作用后可以明显增加环丙沙星8h内透过生物膜的量。结论以医用微孔滤膜为载体可建立铜绿假

2、单胞菌生物被膜体外模型；氨溴索可以显著地促进环丙沙星对细菌生物膜的透过。【关键词】细菌生物膜环丙沙星氨溴索铜绿假单胞菌渗透限制EffectofambroxolonpermeabilityofciprofloxacinacrossABSTRACTObjectiveToinvestigatetheeffectofambroxolonthepermeabilityofciprofloxacinacrossthebacterialbiofilmofPseudomonasaeruginosa.MethodsInvitromodelofP.aeruginosabiofim

3、using0.22μmporediametermedicalmicroporefilmountsofciprofloxacinacrossthebacterialbiofilmeasuredbyHPLCunderdifferentcircumstances:physiologicalsaline,2mg/mland0.75mg/mlambroxol,andclarithromycinpactandonthesurfaceofmicroporefilm.Ciprofloxacincouldsloeatethroughthebiofilmandequilibra

4、tionbroxol,thepermeabilityrateofciprofloxacinsignificantlyincreased.ConclusionsInvitromodelofP.aeruginosabiofilmedicalmicroporefilmasasupporter,andambroxolcansignificantlypromotethepermeabilityofciprofloxacinacrossthebacterialbiofilmofPseudomonasaeruginosa.KEYIC)的测定采用微量稀释法测定环丙沙星、克拉霉

5、素对PAO1菌株的MIC。2.4用HPLC法测定LB培养基中环丙沙星的浓度［4］(1)色谱条件色谱柱：AlltechAlltimeC18(150mm×4.6mm，5μm)，柱温35℃；流动相：稀磷酸∶乙腈为87∶13(三乙胺调节pH至3.0±0.1)；检测波长278μm，流动相流速0.8ml/min。理论板数按盐酸环丙沙星峰计算不低于2000，盐酸环丙沙星峰与相邻杂质峰的分离度符合规定。(2)标准品溶液的配制精密称取于105℃干燥至恒重的盐酸环丙沙星标准品适量(相当于环丙沙星40mg)溶于100ml容量瓶中，加LB培养基溶解至刻度，摇匀；精密量取1、2、4、6

6、和8ml置100ml容量瓶中，加LB培养基溶解至刻度，摇匀，即得不同浓度的系列环丙沙星标准品溶液(0.004、0.008、0.016、0.024和0.032mg/ml)。(3)样品预处理精密吸取样品500μl于EP管中，加入乙腈1000μl，涡旋30s，离心5min(10000r/min)，取上清液20μl进样分析。(4)精密度试验按照标准品溶液配制方法配制低、中、高三种浓度(0.007、0.015、0.030mg/ml)的环丙沙星LB溶液，按样品预处理方法进行预处理，分别于1d内和1周内加样检测6次，以求得日内和日间标准偏差。(5)回收率试验按照标准品溶液配

7、制方法配制低、中、高三种浓度(0.007、0.015、0.030mg/ml)的环丙沙星LB溶液，按样品预处理方法处理后加样进行HPLC检测，计算回收率。3结果3.1BF银染鉴定结果滤膜经银染后，肉眼可见膜表面呈灰黑色着色，色泽均匀、致密，表明滤膜表面有铜绿假单胞菌BF形成。3.2环丙沙星及克拉霉素对PAO1的MIC结果见表1。3.3HPLC测量孔内渗出环丙沙星量的结果(1)HPLC测定环丙沙星浓度的标准曲线结果见图1。标准曲线回归方程为：y=6741+3439513xr=0.9985在0.004～0.032mg/ml范围内线性良好。最低检测浓度为0.004mg

8、/ml。(2)HPLC环丙沙星精密度的