九龙虫对自然衰老大鼠卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白的影响

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1、九龙虫对自然衰老大鼠卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白的影响朱昌国1潘朝旺21.湖北省鄂州市第三医院，湖北鄂州436000；2.湖北省鄂州职业大学医学院，湖北鄂州436000【摘要】目的：观察九龙虫对自然衰老大鼠卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白的影响。方法：15月龄SD雌性大鼠随机分为模型组、阳性对照组、九龙虫低、中、高剂量组，4月龄大鼠为青年组。给药42d后，测定卵巢SOD、GSH-PX活性及MDA含量，采用免疫组织化学分析方法检测卵巢凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达。结果：与青年组比较，模型组SOD、GSH-PX活性和Bax表达降低，M

2、DA含量和Bcl-2表达增加，差异有统计学意义（P<0.01），阳性对照组和九龙虫各剂量组的上述指标均得到改善。结论：九龙虫抗衰老作用可能通过改善卵巢氧自由基及凋亡相关蛋白表达而实现。.jyqkg/(kg·d)，模型组、青年组给予生理盐水15ml/(kg·d)，连续42d。末次给药24h后，称重，进行相应指标检测。2.2卵巢SOD、GSH-PX活性及MDA含量的测定将大鼠用3%戊巴比妥钠40mg/kg腹腔注射麻醉，取左侧卵巢，称重后加9倍重量生理盐水制备匀浆，按试剂盒说明进行SOD、GSH-PX活力和MDA含量的测定。2.3

3、卵巢凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的测定取大鼠右侧卵巢，立即用10%甲醛液固定，石蜡包埋切片，片厚5μm。按照试剂盒说明书步骤作SP法免疫组化染色。以PBS替代一抗作为阴性对照。细胞浆有棕黄色弥散细颗粒者为阳性反应细胞。每张切片随机选取组织结构保存较好的部位,选取10个视野计数。采用Motic6.0数据医学图像分析系统进行光密度法分析。2.4统计学处理数据用SPSS16.0软件进行统计处理，各实验组数据均采用均数±标准差（x±s）表示，用t检验，P<0.05时表示差异有统计学意义。3结果3.1对卵巢SOD、GSH-PX活性及

4、MDA含量的影响与青年组比较，模型组SOD、GSH-PX活性降低，MDA含量升高，差异有高度统计学意义（P<0.01）；阳性对照组和九龙虫各剂量组与模型组比较，SOD、GSH-PX活力升高，MDA含量降低（P<0.05或P<0.01）。见表1。3.2对卵巢凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的影响与青年组比较，模型组Bcl-2降低，Bax升高，差异有高度统计学意义（P<0.01）；阳性对照组和九龙虫各剂量组与模型组比较，Bcl-2升高，Bax降低（P<0.05或P<0.01）。见表2。4讨论卵巢作为女

5、性的性腺，在维持正常生育功能的同时，对女性的生长发育、抵御疾病等方面具有非常重要的作用，女性机体衰老是从卵巢衰老开始的。衰老的自由基学说为目前国际学术界所公认，有研究证明［1］，衰老小鼠卵巢SOD活性较正常小鼠明显降低，MDA含量则明显升高；氧自由基的变化可促使活性氧对蛋白、膜脂和DNA的损伤，在不同程度上引起卵巢功能的减退［2］。本研究表明，与青年大鼠相比，老年大鼠卵巢SOD、GSH-PX活性明显降低，而MDA含量则明显升高，并发现九龙虫可以抑制老年大鼠卵巢SOD、GSH-PX活性的降低，并能降低MDA含量。B细胞淋巴瘤/白血病

6、-2（Bcl-2）蛋白家族是一个特别的家族，目前已发现20多种Bcl-2家族同源蛋白，根据功能不同分为两组，一组为促凋亡蛋白，如Bax、Bid等，另一组为抗凋亡蛋白，如Bcl-2、Bcl-x等［3］。Bcl-2通过编码蛋白发挥调控作用，是重要的凋亡抑制基因，可与Bax形成能阻遏细胞凋亡异源二聚体。Bax过量表达时，可自身结合成同源二聚体，促进凋亡的发生。李亚丽［4］等研究表明，D-半乳糖衰老大鼠较正常大鼠卵巢细胞Bcl-2表达量减少，Bax表达量增加，提示衰老可能跟促进卵巢细胞凋亡有关；我们对自然衰老大鼠的研究也得到同样结果，并发

7、现九龙虫促进Bcl-2表达，抑制Bax表达。综上所述，九龙虫可通过影响卵巢氧自由基的产生及凋亡相关蛋白的表达，增加SOD、GSH-PX活性和Bax表达，减少MDA含量和Bcl-2表达而起到抗衰老作用。.jyqkdifferentsitesinthemitochondrialelectrontransportchain［J］.JBiolChem,2002,277(47)：44784.［3］XuD,atogeniccellsinrats［J］.JReprodContrac,2005,16(1)：23-28.［4］李亚丽,楚伟,王方娜,

8、等.何首乌饮对衰老大鼠卵巢组织凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2及Caspase-3表达的影响［J］.中国新药杂志,2011,20(18)：1791-1794.(收稿日期：2014.12.05)