001-经口急性毒性试验方法-改良寇氏法

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1、急性毒性试验方法――改良寇氏法Kärber法由Kärber于1931提出，后经Finney改进，顾汉颐作过改进，1963年孙瑞元教授对该法进一步改进，改进后的计算方法称为点斜法或孙氏法，增加了不含0%和100%死亡率的校正式，所得LD50及全部有关参数与正规概率单位法相近。改良寇氏法（Käber）试验设计的原则是：各组剂量按等比级数；各组动物数相等：大致有一半组数的动物死亡率在10%～50%之间，另一半在50%～100%之间，最好出现0%和100%的剂量组。一、剂量选择及分组1、剂量选择剂量设计是否合理是急性毒性试

2、验能否成功的关键。探求外源化学物的急性毒性，测定其LD50或LC50时，应首先广泛查阅文献资料，了解该化学物的化学结构和理化性质，如结构式、分子量、溶解度、挥发度、纯度及杂质含量等，其次确定测定LD50的计算方法，然后设计剂量。2、预试验：总的原则是先用少量动物，以较大的剂量间距染毒，求出粗略的致死剂量范围，即确定受试动物全部致死的最小剂量（b）和全部不致死的最大剂量（a），即求出待测化学物0%~100%的大致致死剂量范围，然后在这个剂量范围内按几何级数的间距设计5~7个剂量组，组间剂量呈等比级数（r），其比值为1

3、.2~1.5。进行正式实验。用于急性毒性试验时，动物的体重为：大鼠180~200g，小鼠18~22g，豚鼠200~250ｇ，家兔2~2.5kg，犬10~12kg。用于实验的同一批动物体重变异范围不得超过所用动物平均体重的20%。仍然遵守雌雄各半或雌雄兼取的原则。当预试中发现化学物的毒性有明显的性别差异时，则需要选用雌、雄两种性别的动物分别进行试验，求出各自的LD50。通过预试，找出受试化学物引起动物死亡的大致剂量范围，以此为依据设计正式试验的剂量和分组。按下式设计剂量组：式中：r—相邻两组剂量的比值，一般为1.2～

4、1.5，b—最低全致死剂量量，a—最高不致死剂量，n—设计的组数。分组恰当与否也是确保实验结果准确的条件之一。因为组数过多，需要消耗较多的动物，还可能出现较大剂量组动物死亡率低于较小剂量组；组数过少，不能较精确求出LD50。3、根据公比(r)计算各组剂量各组剂量分别为：第一组：a第二组：ar第三组：ar26第四组：ar3第五组：ar4第六组：ar5二、受试物溶液配制1、溶剂的选择毒理学试验中，常用的剂型有液体剂型、固体剂型。液体剂型中有溶液剂、混悬剂、乳化剂等。选择溶剂的原则是不与受试物发生化学反应，不改变化学物的

5、毒性，故应根据受试物的理化性质，选择适当的溶剂。一般而言，水溶性化学物可选择蒸馏水或生理盐水，以水为溶剂，既经济、方便、易吸收，又无毒副作用。脂溶性化学物多选用植物油，如花生油、橄榄油。不溶于水而溶于油的化学物常用吐温-80或吐温-60配制成乳化剂。既不溶于水又不溶于油脂的化学物可选择淀粉液、明胶液、羧甲基纤维素钠液（0.5-1%CMC）等助悬剂配制成混悬液。如用有机溶剂，实验动物应设溶剂对照组，有机溶剂所用比例不宜超过10%，溶解后，再用水稀释，必要时可加入增溶剂，如吐温-80、聚乙二醇等，以提高溶液剂的浓度。2

6、、配制方法受试化学物的配制方法有等浓度稀释法和等容量稀释法。等浓度稀释法　将受试物配制成一种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积不同，剂量越高，所用的体积越大；剂量越低，所用的体积越小。比如某受试物的试验剂量分别为100、200、400和800mg/kg，受试物配制成10mg/ml，每组动物每10g体重分别给与0.1、0.2、0.4和0.8ml。等容量稀释法　将受试物配制成不同浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给受试物的体积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓度越高。上例中，若实验动物按0.2ml/10g

7、b.w容量灌胃,则应配制成4个不同浓度,即5mg/ml、10mg/ml、20mg/ml和40mg/ml。灌胃体积依所选用的实验动物而定，一次灌胃的体积为：小鼠0.1～0.4ml/10gb.w，每只不超过1ml；大鼠0.5～1ml/100g，每只不超过4ml;家兔在5ml/kg之内;犬不超过50ml/kg；为避免操作误差，等容量稀释的传统方法常采用1∶K系列稀释法。该法操作简便、浓度精确、节约受试化学物。a、确定各剂量组所需受试液浓度如已知最高剂量组剂量为2000mg/kgb.w.，小鼠按等容量方法给予受试药液，即0

8、.2ml/10gb.w.，相当于20ml/1000gb.w.，故最高剂量组所需受试液的浓度（母液浓度）为2000mg/20ml，即10.0%（C1）。b、确定每组所需受试液的量（mml）按每只鼠体重25g计算（将损耗也计算在内），给药量为0.2ml/10gb.w.，则每组10只动物所需受试液的量为5ml；c、确定母液总量配制时，根据实验设计要求确定最高剂量组