高原严重烧伤延迟复苏大鼠脑损伤与兴奋性氨基酸水平

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1、高原严重烧伤延迟复苏大鼠脑损伤与兴奋性氨基酸水平【摘要】目的：观察高原严重烧伤延迟复苏后早期大鼠脑损伤及兴奋性氨基酸含量的变化.方法：130只雄性）烧伤实验动物模型（TBSA30％，Ⅲ度）.运用高效毛细管电泳法检测脑组织中兴奋性氨基酸（谷氨酸，Glu）含量，采用干、湿重比重法测定脑组织含水量，原位末端标记（TUNEL）观察脑皮质神经细胞凋亡.结果：从兰州地区急进高原后，大鼠脑组织Glu含量、脑组织含水量、脑皮质中TUNEL阳性细胞数均未发生明显改变（P>0.05）；高原严重烧伤后脑组织Glu水平于伤后1h即显著降低，持续至伤后

2、24h，于伤后72h恢复至正常水平（P<0.05）；延迟复苏组脑组织Glu水平在观察时限内均低于上述两正常对照组，延迟复苏组与即时复苏组相比除在伤后12h时相点无统计学差异外，其余时相点均低于即时复苏组（P<0.05）.而脑组织含水量于伤后6h开始升高，于24h达高峰，于伤后7d降至正常水平；高原烧伤延复组变化趋势同高原烧伤即复组，但伤后7d仍未恢复.脑皮质TUNEL阳性细胞在伤后1h即增多，也于伤后24h达高峰，伤后7d仍高于正常水平.结论：由兰州地区急进到高原地区，并不足以导致大鼠脑组织中兴奋性氨基酸含量发生变化及大

3、鼠脑水肿的发生和脑皮质凋亡细胞数的增加；高原严重烧伤及延迟复苏后，细胞外兴奋性氨基酸减少，同时伴有受伤大鼠迅速出现脑水肿，脑皮质凋亡细胞显著增加.【关键词】烧伤；延迟复苏；兴奋性氨基酸类；脑水肿；细胞凋亡；大鼠　　0引言　　严重烧伤引起的脑损伤及脑水肿在平时和战时均很常见，已有大量文献报道［1-3］.大量研究显示兴奋性氨基酸（excitatoryaminoacids,EAAs）的大量释放而产生的毒性作用，在加重继发性脑损伤中起重要作用.本研究利用大鼠严重烧伤后即时复苏与延迟复苏模型，初步观察高原严重烧伤延迟复苏后早期大鼠脑组织中兴奋

4、性氨基酸含量变化及与脑损伤的关系.　　1材料和方法　　1.1材料　　健康雄性a）；Brij35（美国Amresco）；L谷氨酸（北京拜尔迪生物技术有限公司）；多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒（南京建成生物工程研究所）；其余试剂均为国产分析纯；高效毛细管电泳仪（LP/ACE5000）（美国BeckmanCoulterCo.）.　　1.2方法　　1.2.1动物模型及分组　　致伤前1g/kg）后，除正常对照组外，于大鼠背部建立30%Ⅲ度烫伤模型（病理证实）.致伤条件为90℃，20s.正常对照组：模拟烫伤（

5、37℃水浴，20s）.动物随机分为4组：高原烧伤即时复苏组（高伤即复，n=60），伤后立即腹腔注射等渗盐水（按Parkland公式）4mL/kg；设立观察与检测时间点：1h（PB1h），6h（PB6h），12h（PB12h），24h（PB24h），72h（PB72h），7d（PB7d）；高原烧伤延迟复苏组（高伤延复，n=50），伤后6h开始补液；设立观察与检测时间点：PB6h，PB12h，PB24h，PB72h，PB7d；高原正常对照组（高正常，n=10），不补液.兰州地区正常对照组（兰正常，n=10，海拔1517m），不补液.　　

6、1.2.2取材和实验　　高伤即复组大鼠于伤后1，6，12，24，72h，7d6个时相点，高伤延复组大鼠于伤后6，12，24，72h，7d5个时相点分别取材，每个时相点各取10只动物，固定于实验台，于各时相点抽血后，将大鼠断头，迅速取脑，置0℃冰盐水冲洗，去除血液、大血管等结缔组织，吸干；用0.1mol/L磷酸缓冲液冲洗后，用双面刀片于脑正中线将脑组织纵形剖开，将大脑左半球切取完整的薄片（约0.5cm）后置于40g/L的中性甲醛混合固定液，放于4℃冰箱，用于光镜检查及免疫组织化学检测.将上述剩余脑组织大脑皮质，用电子天平称重后置于80

7、℃烤箱36h再称重，利用组织干湿重比值，观察脑组织含水量，以检测脑水肿的变化.将大脑右半球迅速放置于冻存管中置于液氮中保存，用于兴奋性氨基酸的检测.　　谷氨酸含量采用高效毛细管电泳法［4］检测脑组织中谷氨酸含量.所得结果用μmol/g表示.脑组织含水量采用干湿比重法测定［5］：脑组织含水量=（湿重-干重）/湿重×100%.细胞凋亡实验步骤按文献［6］及说明书并稍作改进进行.DAB显色，显微镜下观察，细胞核中出现棕黄色颗粒者为TUNEL阳性细胞，即凋亡细胞.　　统计学处理：所得数据以x±s表示，采用SPSS统计软件对组间差异进行单因素

8、方差分析及两两比较，P<0.05为有统计学意义.　　2结果　　2.1谷氨酸浓度变化急进高原（高正常）后脑组织Glu水平较兰正常组稍降低，但统计学无差异（P>0.05）；高原严重烧伤后，高伤即复组Glu水平于伤后1h即显著低