鸡热休克蛋白-70(hsp-70)酶联免疫分析

《鸡热休克蛋白-70(hsp-70)酶联免疫分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、鸡热休克蛋白-70(HSP-70)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检测范围：96T10ng/L-400ng/L使用目的：本试剂盒用于测定鸡血清、血浆及相关液体样本屮热休克蛋白-70(HSP-70)含U。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鸡热休克蛋白-70(HSP-70)水平。用纯化的鸡热休克蛋白-70(HSP-70)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入热休克蛋白-70(HSP-70),再与HRP标记的热休克蛋白-70(HSP-70)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的

2、催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品屮的热休克蛋白-70(HSP-70)呈正朴I关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品巾鸡热休克蛋白-70(HSP-70)浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20mlX1瓶7终止液6mlX1瓶2酶标试剂6mlXl瓶8标准品(800ng/L)0.5mlXl瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5mlXI4样品稀释液6mlX1瓶10说明书1份5显色剂A液6mlX1瓶11封板膜2张6显色剂B液6mlXl/瓶12密封袋1个标本要求1.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，

3、提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20°C保存，但应避免反复冻融2.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管屮进行稀释。400ng/L5号标准品150pl的原倍标准品加入150pl标准品稀释液200ng/L4号标准品150pl的5号标淮品加入150pl标准品稀释液100ng/L3号标准品150pl的4号标准品加入15Opl准品稀释液50ng/L2号标准品150pl的3号彳小准品加入150pl标准品稀释液25ng/L1号标准rSi150p

4、l的2号标准品加入150pl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50pl,待测样品孔屮先加样品稀释液40pl，然后再加待测样品10pl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。1.温育：用封板膜封板后置376C温育30分钟。2.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用3.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静罝30秒后弃去，如此重复5次，拍干。4.加酶：毎孔加入酶标试剂50pl,空白孔除外。5.温育：操作

5、同3。6.洗涤：操作同5。7.显色：每孔先加入显色剂A50pl，再加入显色剂B5（Hd,轻轻震荡浞匀，37°C避光显色15分钟.8.终止：每孔加终止液50pl,终止反应（此吋蓝色立转黄色）。9.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。操作程序总结：加入准备好的样品和标准品，37°C反应30分钟洗板5次，加入酶标试剂，37°C反应30分钟洗板5次，加入显色液A、B,37°C显色10分钟加入终止液15分钟之内读0D值计算计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘山标准曲线，根据样品的OD值由标准曲

6、线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或川标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋屮保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样吋间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4.请每次测定的同时做t小•准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD

7、值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物请避光保存。7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数力准.8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9.本试剂不同批号组分不得混用。10.如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1.试剂盒保存：；2-8'C。2.有效期：6个月