鸡白介素12(il-12p70)酶联免疫分析

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1、鸡白介素12(IL-12/P70)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号：CSB-E12836C检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml最低检测限：3.9pg/ml特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的鸡IL-12/P70，且与其他相关蛋白无交叉反应。有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定鸡血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-12/P70含量。说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。3．中、英文说

2、明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。概述白细胞介素12(interleukin12，IL-12)主要由B淋巴细胞产生。IL-12是由二硫键联接的异源双体，两个亚单位的分子量分别为35kDa和40kDa,等电点在pH4.5-5.5。人IL-12P35亚单位有197个氨基酸残基，含7个半胱氨酸和3个N糖基化位点。P40亚单位306个氨基酸残基，有10个半胱氨酸，4个N-糖基化位点。在生理情况下，亚单位中的半胱氨酸残基之间可能形成复杂的分子间

3、二硫键结构。两个亚单位是由不同的基因所编码。P35与IL-6和G-CSF有同源性，P40与IL-6受体、睫状神经营养因子(CNTF)受体、G-CSF受体有同源性，具有细胞因子受体家族的特征。提示IL-12分子可能是一种细胞因子/可溶性细胞因子受体复合物。人IL-12作用有种属特异性。IL-12具有多种生物学功能，首先能与IL-2协同诱导CTL的分化，促进同种异体CTL反应；刺激PHA活化CD3+T细胞(包括CD4+和CD8+)增殖；协同IL-2诱导CD56+NK细胞增殖以及LAK细胞产生，促进ADCC功能，NKSF释放，诱导CD5

4、6、CD2、CD11a、IL-2R、TNFR(CD120b)、LFA-1和ICAM-1等分子的表达；促进B细胞Ig产生和Ig类型转换，由IgM转为IgG，抑制IL-4诱导B细胞IgE合成。实验原理用纯化的抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗IL-12/P70抗体的微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的抗IL-12/P70抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-12/P70呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度

5、（OD值），计算样品浓度。试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assayplate)：一块（96孔）。2.标准品（Standard）：2瓶(冻干品)。3.样品稀释液(SampleDiluent)：1×20ml/瓶。4.生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibodyDiluent）：1×10ml/瓶。5.辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidinDiluent）：1×10ml/瓶。6.生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）1.辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：

6、1×120μl/瓶（1：100）2.底物溶液（TMBSubstrate）：1×10ml/瓶。3.浓洗涤液（WashBuffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。4.终止液（StopSolution）：1×10ml/瓶（2NH2SO4）。需要而未提供的试剂和器材1.标准规格酶标仪2.高速离心机3.电热恒温培养箱4.干净的试管和Eppendof管5.系列可调节移液器及吸头，一次检测样品较多时，最好用多通道移液器6.蒸馏水，容量瓶等标本的采集及保存1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000xg离心20分

7、钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。2.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8°C1000xg离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。3.细胞培养物上清或其它生物标本：1000xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。标本的稀释原则：首先通过文献检索的方式了解待测样本的大致含量，确定适当的稀释倍数。只有稀释至标准曲线的范围内，检测的结

8、果才是准确的。稀释的过程中，应做好详细的记录。最后计算浓度时，稀释了“N”倍，标本的浓度应再乘以“N”。标准品的稀释原则：2瓶，每瓶临用前以样品稀释液稀释至1ml，盖好后静置10分钟以上，然后反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为1000pg/ml，做系