n末端糖基化增加口腔鳞状细胞癌中cthrcl蛋白的稳定性研究

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1、N末端糖基化增加口腔鳞状细胞癌中Cthrcl蛋白的稳定性研究-->前言头颈部的麟状细胞癌是目前世界上排名第六的最流行的恶性肿瘤，它具有高发病率和生存率低的特点[1-3]。大量的研究以及近期完整的基因测序对肿瘤分子特征的描述的新进展，确定了那些与头颈部麟状细胞癌的病理过程相关的信号通路的重要组成成分[4，5]。从而发现，90%的头颈部麟状细胞癌归因于表皮生长因子的过表达，60%的头颈部麟状细胞癌归因于P53的突变，20%的头颈部麟状细胞癌归因于Notch信号通路的功能丧失。口腔和口咽部的麟状细胞癌占了头颈部肿瘤的绝大部分⑴。尽

2、管针对于头预部鳞状细胞癌有着诊断和化疗策略，但是其生存率依然很低，并且其发病率有上升的趋势。目前改进治疗效果的难点就集中在化疗应针对口腔麟状细胞癌病理机制中的下游功能祀点⑴。所以，对口腔麟状细胞癌的早期发病及发展的分子行为的理解将是找到阻断肿瘤病理过程的治疗方法和改进治疗方案的重点。经典的Tris(MNaCl4.38g,l%TritonX-1005ml,1%脱氧胆酸钠5g，0.1%SDS0.5g,蒸馆水至500nil,调pH值至7.5。2、蛋白酶抑制剂cooktail:PMSFlmmol/L,LeupeptinO.lmmol

3、/L,Aprotininlug/ml,以以上的终浓度加入裂解液中。...........................二、免疫沉淀实验（IP)(一）试剂1.PBS：8gNaCl、0.2gKCK1.44gNa2HP04、0.24gKH2P04溶于800ml双蒸水中，用HCI调PH至7.4,在补加水至IL,高压灭菌后保存于室温。2.NaCl：5.8gNaCl溶于80m丨双蒸水中，再补加水至lOOml,高压灭菌。3.1MTris(pH7.5)：12.1gTris碱，溶于80ml双蒸水，用HCI调pH至7.5，再补加水至100ml

4、。4.蛋白酶抑制剂：Aprotinin和Leupeptin溶于双蒸水，PMSF溶于异两醇，浓度均为10mg/m!o5.N-40：10%(MHEPES(pH8.0)。7.细胞裂解液：50mMTris(pH7.5)、150mMNaCK0.1mg/mlPMSF、lug/mlAprotinin、lug/mlLeupeptin、l%NP-40>0.5%脱氧胆酸钠。............................第二部分.............42-50材料与方法...............43-47结果..........

5、..........47讨论最近有研究指出，Ror2在口腔麟状细胞癌中的表达升高的。然而他们的实验研究的肿瘤标本和对照组的正常组织标本并不是来自同一患者，正常组织是来自健康的志愿者，并且，这些上皮组织也不是来自口腔的同一部位的粘膜上皮。首先，他们没有确定是不是在不同的个体中Ror2的表达相同，并且，不同部位的粘膜上皮中的Ror2的表达是否相同也不可而知，所以我们认为他们的结果并不十分可信。所以，我们在十一位舌憐状细胞癌的患者手术中取了肿瘤标本，并且在同一个患者取肿瘤临近的正常粘膜上皮作为对照组。在我们的实验中得出的结果与他们

6、的结果正好相反。我们的结果显示，Ror2在口腔麟状细胞癌中的表达是降低的。所以，我们的结果更为可信。...........................结论我们的结果证明了N末端糖基化和经典Wnt信号通路的激活能够引起Cthrcl的表达升高，也就是DPAGT1与Wnt/P信号通路形成的反馈环的异常激活能够导致Cthrcl在口腔鳞状细胞癌中的异常高表达。结果也间接的说明，Cthrcl可能通过Wnt/PCP信号通路在口腔鳞状细胞癌的晚期促进癌细胞的迁移，从而导致肿瘤的转移。...........................