细菌学检验的方法和结果分析

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1、细菌学检验的方法和结果分析刘琳（黑龙江省农垦北安管理局中心医院黑龙江北安164095）【摘要】目的：探讨细菌学检验的方法和结果分析。方法：对细菌标木进行采集和送检。结论：细菌的检验对细菌的感染控制有很大的帮助。因此，要加大力度,更好地发挥临床微生物检验在医院感染控制中的作用。【关键词】细菌学；检验；【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1007-8231（2016）01-0220-011.标木釆集与注意事项1.1标木采集的时间标木采集应在早期和未服用抗菌药物之前。1.2标木釆集的种类检验标木主要以

2、患者的大便为主。某些情况下，患者的呕吐物、沾染粪便的衣物和尸体的肠内容物及环境水样亦可作为检材。1.3标木采集的方法以采集患者粪便为主，采样时可用灭菌小勺或棉拭采取自然排出的新鲜大便，亦可用直肠棉拭或采便管由肛门插入直肠内3〜5cm处转动取出。采用后者应注意棉拭大小适宜，避免釆便量过少。一般要求水样便釆取1〜3ml，成形便采取指甲大小（2〜3g）的粪量；采呕吐物、沾染粪便的衣物等，用无菌棉拭蘸取标木后插入碱性蛋白胨水管中送验；采水样时，用无菌采样瓶采水450ml送验（检验时将标木全部倒入含5%食盐及10%蛋白

3、胨的浓蛋白胨水50ml中，增菌培养后按粪便标木检验方法进行分离培养。1.4标木的送检采得的患者标木应在床边立即接种于培养基，不能立即检查的，要接种于碱性蛋白胨水或文.腊保存液或插入Cary-Blair半固体保存培养基中保存，尽快送往检验室。标本与保存液的比例要适当，8〜10ml保存液可加入I〜3ml液体便或指甲大小的成形便，过多的大便量可降低保存液的pH。送检标本吋应填写“标本送检单”，人源性标本应写明患者姓名、地址、发病时间、采集时间、临床诊断等。2.检验方法和结果2.1病原学检查2.1.1显微镜检取黏液絮

4、状的粪便标本直接涂片，空气自然干燥，在火焰上加热固定，用革兰或用h10稀释的复红染色，镜检有无弧菌。一般新鲜粪便中弧菌形态较典型，排列成鱼群状。取洁浄的凹玻片，凹窝上涂上凡士林或滴水少许，取生理盐水1滴放在盖片中央，然后加粪便材料或新鲜培养物少许混合制成菌液，迅速小心地将盖玻片翻转轻放于凹片上，借凹窝周围的凡士林或水滴固定之，然后置高倍镜下观察动力。如无凹片，可采用压滴标本观察动力，取菌液I滴置于载物玻片上，复以盖玻片，高倍镜下观察动力。2.1.2分离培养液体增菌培养：将患者米泔样粪便或保存液检材采用火菌毛细

5、管吸取lml左右，接种于碱性蛋白胨水中或直接将采便棉拭接种于碱性蛋白胨水中增菌培养。霍乱弧菌特别是埃尔托生物型在碱性蛋白胨水中生长迅速，易在表面上生成菌膜，37°C增菌6〜8小吋后，可取表面生长物或菌膜平板划线分离，同时做涂片染色和动力检査，必要时做再次碱性蛋白胨水增菌培养。2.2血清学检查期工程血清学检查抗体的成分为抗菌抗体。为进行血清学诊断，需要采取患者的双份血清，在发病第1〜3天采第一份血清，第15〜20天采第二份血清。检查血清中抗菌抗体常用凝集试验和杀弧菌试验，后者比前者敏感。血清学检查奋助于进行流行

6、病学追溯诊断。2.2.1试管凝集试验用生理盐水对倍连续稀释待检血清，每管含稀释血清0.5ml。将标准菌在营养琼脂上的16〜18小时培养物用0.2%甲醛生理盐水制成约含水量18亿菌/ml（相当于细菌标准比浊管浓度）的悬液，每一稀释血清管加0.5ml；另将菌悬液加入0.5ml生理盐水中作对照。摇匀，置37"C3小吋观察初步结果，再放冰箱（4°C＞或室温过夜，观察最后结果。生理盐水对照不出现自然凝集，能使菌凝于管底成伞状，上清半透明者判为++,以能使菌呈++凝集的血清最高稀释度判为血清凝集效价。第二份血清效价比第-

7、•份血清增长4倍或以上者冇诊断意义。2.2.2杀弧菌抗体检测于经洗涤处理、无水乙醇浸泡和紫外灯照射火菌的微量培养板或4×10孔聚苯乙烯塑料板用微量加液滴管每孔加入I滴（0.225ml）火菌磷酸盐缓冲盐水PBS或生理盐水，再将待测火活血清I滴（0.025ml）加入每排的第I孔，自第1孔开始做连续对倍稀释至第10孔。每孔稀释血清加入补体指示菌悬液I滴，加盖，在微型振荡器上振荡I〜2分钟，置37°C水浴箱孵育30分钟。加入含0.01%TIC的营养肉汤0.15ml（2大滴），混匀后，继续置37%水浴箱孵育

8、4小吋。观察结果，以孔内无颜色变化的血清最高稀释度为被检测标本的杀弧菌抗体滴度，第二份血清效价比第一份血清升高8倍或以上者冇诊断意义。2.3快速辅助诊断2.3.1制动试验急性患者的水样便中含大量弧菌。取1滴滴在玻片上，直接镜检可见具有流星状动力的细菌，当加入I滴01群霍乱免疫血清后，运动停止，凝集成块。根据这种特殊动力和制动试验，可在几分钟之内做出初步诊断。2.3.2免疫荧光菌球法将水样、食品或粪便