hplc法测血清奥氮平浓度

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1、HPLC法测血清奥氮平浓度【摘要】用高效液相色谱法测定血清中奥氮平的药物浓度，方法简便、快速、灵敏、特异，适用于临床常规和研究应用。【关键词】高效液相色谱法奥氮平奥氮平为苯并异唑衍生物，是新一代的抗精神病药物，并已广泛应用于临床，因而在临床上误服、服毒自杀时有发生。为了配合临床上的急救以及使给药方案更加合理化，我们建立了奥氮平的液相色谱定性定量的分析方法。1材料和方法高效液相色谱法在药物分析中的应用是近年来飞速发展的新技术。目前，用HPLC法快速测定血中奥氮平浓度的方法国内报道甚少，我们在参考国外有关文献资料的基础上结合临床实际，试图在国内首先建立一个取样量少、分析周期短、灵敏度

2、高的实验方法，以满足临床实际的需要。1.1实验部分1.1.1仪器及试剂(1)仪器美国惠普HP1050高效液相色谱仪伴惠普HP1050紫外分光检测仪及色谱工作站。色谱柱为200×4.6mm不锈钢柱，内充5μmSpherisorbC18(34/73)。(2)标准物奥氮平标准对照品。(3)溶剂甲醇；三氯乙酸CCl3COOH；乙酸乙酯CH3COOC2H5；四硼酸钠Na2B4O7·10H2O；磷酸氢二钠Na2HPO4·12H2O；水为双重蒸馏水。1.1.2试剂配制（1）标准储备液用双重蒸馏水配成1mg/ml溶液，4℃保存。（2）标准应用液用双重蒸馏水稀释成100μg/ml溶液，4℃保存。（

3、3）50mmol/LNa2HPO4缓冲液准确称取8.9535gNa2HPO4·12H2O于500ml容量瓶中加双蒸水至刻度。（4）0.05mmol/L四硼酸钠溶液准确称取1.90685gNa2B4O7·10H2O于100ml容量瓶中加双蒸水至刻度。（5）准确称取10gCCl3COOH于100ml容量瓶中加双蒸水至刻度。（6）流动相取甲醇、双重蒸馏水按70:30的比例（v/v）配制，用前超声波脱气。1.1.3实验方法（1）色谱条件分析柱：色谱柱：Spherisorb-C184.6×200mm。流动相流速：1ml/min。检测波长：276nm。满量程吸光度：0.02。记录仪纸速：4m

4、m/min。柱温：室温。（2）病人标本收集和保存病人服用固定剂量达稳态血药浓度后，于清晨服药前取肘或颈静脉血2ml，及时分离出血清。不能及时测定的血清密封后冰冻保存。（3）样品的预处理①取血清1ml，加入10%三氯乙酸1ml，在旋涡混合器上混合振荡2分钟。②在3000r/min离心机上离心5min后，取出上清液，加入乙酸乙酯/0.05mol/L四硼酸钠（50:25v/v）振荡8min，经3000r/min离心5min后，取上清液，N260℃吹干。残渣用100μl流动相溶解，取20μl进行液相色谱分析。2计算测出药物的峰面积，以血清应用液的峰面积为自变量，浓度为因变量，算出相关系数

5、及回归方程，用标本的峰面积由回归方程算得结果。3结果3.1色谱行为在本实验条件下，奥氮平保留时间为4.9min。3.2线性关系及检测限在空白血浆中分别添加奥氮平使血药浓度相当于2、5、10、20g/L,在上述实验条件下进行分析，所得数据经计算机进行回归，得到峰面积A与质量浓度C（g/L）的关系：A=1.78×104+0.12×104C；相关系数为0.99。3.3回收率与精密度配制含奥氮平质量浓度分别为2、5、10、20g/L的标准血浆样品各五份，在上述实验条件下进行分析，测得血浆中奥氮平回收率；另取上述四种质量浓度标准血浆，对每一质量浓度当日测定5次，求得日内相对平均偏差；四种质

6、量浓度的血浆放置于冰箱保存，每天测1次，连续测定5次，求得日间平均相对偏差3.4检测波长对奥氮平的标准溶液（g/L）进行全波长扫描，在276nm外有较强的吸收，故选定检测波长为278nm。4讨论4.1本文采用HPLC法测血清奥氮平浓度，具有操作简单、取样量少、分析周期短、灵敏度高的特点，使奥氮平血药浓度的得知快速、简洁。4.2经专属性考察，常用的抗精神病药（氯氮平、冬眠灵、奋乃静）在该色谱条件下对奥氮平的测定无干扰。4.3本文采用血样经三氯乙酸沉淀蛋白后进样的方法来测定，经上百次试验，对柱压无明显影响。4.4本实验方法对病人无痛苦，对实验人员无危害。对节省医院及病人非合理用药造成

7、额外治疗费具有很大意义。