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时间:2018-11-13
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1、HPLCELSD法测定芪红胶囊中黄芪甲苷的含量【关键词】芪红胶囊;黄芪甲苷;高效液相色谱 Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminingthecontentofastragalosideIVinQihongcapsule.MethodsAstragalosideIVnosilC18column(4.6mm×250mm,5μm)usingacetonitrileobilephase.ResultsThecalibrationcurveethodis
2、accurate,reliableandreproducible,onsilC18(4.6mm×250mm,5μm)(迪马公司产)为色谱柱;乙腈水(体积比35∶65)为流动相;柱温:30℃;流速1.0mL/min;SEDEX55蒸发光散射检测器(漂移管温度60℃,增溢为7,气压2.1×105Pa)。在此色谱条件下,黄芪甲苷与样品中其他组分分离良好,理论板数按黄芪甲苷色谱峰计大于3000。色谱图见图1、2。 图1黄芪甲苷对照品HPLC图 略 图2芪红胶囊HPLC图 略 2.2对照品溶液的制备精密
3、称取黄芪甲苷对照品12.65mg,置25mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。 2.3供试品溶液的制备精密称取样品8g,加水50mL使溶解,转移至分液漏斗中,用水饱和的正丁醇提取5次,每次30mL,合并正丁醇液,以氨试液洗涤5次,每次20mL,弃去氨试液,合并正丁醇液,蒸干,残渣用甲醇溶解并转移至5mL量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,作为供试品溶液。 2.4线性关系考察分别精密吸取上述对照品溶液5、10、15、20、30μL,注入液相色谱仪,照上述
4、色谱条件测定黄芪甲苷峰面积,以对照品进样量(m)自然对数为横坐标、峰面积值(A)自然对数为纵坐标,绘制标准曲线,测定结果表明,黄芪甲苷对照品在进样量2.53~15.18μg范围内呈良好的线性关系,回归方程为:A=1.5210m+10.6662,r=0.9997。 2.5精密度试验分别精密吸取上述对照品溶液10μL,连续进样5次,测定黄芪甲苷峰面积值,求得黄芪甲苷峰面积值平均值为537179,RSD为1.2%,结果表明仪器精密度良好。 2.6稳定性试验精密称取本品,照上述方法制备供试品溶液,精密吸取
5、15μL,在上述色谱条件下,每隔一定时间进样,测定黄芪甲苷峰面积值,求得黄芪甲苷峰面积值平均值为636505,RSD值为1.6%,表明样品在24h内基本稳定。 2.7回收率试验精密称取芪红胶囊6份,每份约8g,照前述供试品溶液制备方法制备,精密吸取供试品溶液15μL,进样,测定,计算含量,求得黄芪甲苷含量平均值为0.099mg/粒,RSD为2.0%,表明本法测定的重复性良好。 2.8准确度试验采用加样回收法,取已知含量样品(黄芪甲苷含量为:0.099mg/粒)6份,精密称取各约4g,分别精密加入黄
6、芪甲苷对照品,照供试品溶液制备方法制备,照上述色谱条件,精密吸取供试品溶液15μL,进样,测定,计算,求得黄芪甲苷平均回收率为99.4%,RSD为2.0%。结果说明本法准确。 图3缺黄芪阴性对照HPLC图 略 3讨论 3.1供试品溶液的制备由于黄芪甲苷类成分在正丁醇中的溶解度比较大,因此选用正丁醇进行提取,经回收试验证明方法可行。曾试验采用未经氨试液处理的供试品溶液进行测定,含量大大偏低,故供试品溶液经氨试液处理才能进行含量测定。 3.2检测器的选择黄芪甲苷的含量测定法有薄层扫描法[1~3],
7、紫外检测的HPLC法[4]及HPLCELSD法[5~6],由于薄层扫描法对黄芪甲苷的含量测定结果误差大,紫外检测的HPLC法则选择203nm的末端吸收波长来测定,其误差也很大,故目前专家建议采用HPLCELSD法测定,此方法减少了误差,满足了含量测定的要求,故本文也选择蒸发光散射检测器。 3.3流动相的选择HPLC测定选择了乙腈水(体积比35∶65),乙腈水(体积比30∶70),甲醇水(体积比35∶65)几种流动相体系,通过比较分离情况,确定了上述体系,该体系使各成分得到了较好的分离,满足
8、定量的要求。 3.4本文以高效液相色谱法测定芪红胶囊中主要成分黄芪甲苷的含量,方法分析条件易于精确控制,待测成分易于分离,且具有较好的重现性和较高的精密度,为中药芪红胶囊的质量标准的制订提供了依据。【
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