细胞组织培养重点

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1、体外培养包括组织培养、细胞培养、器官培养Tissueculture:从体内収出组织摹拟体内的生理环境，在无菌、适当温度、和一，定营养条件不，使之生存和生长并维持其结构和功能的方法。细胞培养：培养物是单个细胞或细胞群。细胞在培养时都耍生活在人工环境中，由于环境的改变，细胞的移动或受一些他因素的影响，培养时问加长，传代导致细胞出现单一化型。器官培养：与组织培养条件相似，培养的足器宵的原基，器官的一部分或整个器宮，以便能够在体外生存、生长和保持一定功能的方法体内外细胞分化的差异：“反祖”（Atavism）现象：细胞失

2、去原奋纟II织结构和细胞形态、分化减弱或不显；表现为细胞趋于单一化，或获得永生性，或变成具有恶性性状的细胞群。不适应（deadaption）细胞在原体内时所拥冇的分化特征减弱或不显.。（培养的肝细胞酪氨酸转移酶特性丧失）。生存条件改变使分化阻抑。脱分化或去分化：细胞失掉发生分化的能力（培养的肝细胞火掉产生精鉍酸酶、鉍菽转移酶等特性后，则失去储存肝糖原能力）。是基因突变所致培养细胞在体外生存时间与其分化能力呈反向关系。细胞分化的关键在于是否存在冇诱导细胞发生分化的因了原代培养（primaryCulture）从体内

3、取出组织接种培养到第一次传代阶段。细胞群是异质的，细胞相互依赖性强。细胞独立生存性差。传代培养：当细胞增殖达到一定密度后，需耍分离岀一部分细胞和更新培养液，继续接种进行培养。这一过程称为传代。否则将影响细胞的继续生存。组织培养细胞生命期：原代培养期传代期衮退期细胞系（cellline）：初代培养细胞一经传代后，称做细胞系。无限细胞系：细胞获永久性增殖能力。核型大多变成异倍体。克隆形成率（CloningEfficiency）:细胞被稀释分散成单个细胞进行培养时，形成细胞小群（克隆）的百分数。克隆细胞株:从-•个经

4、过牛.物#鉴定的细胞系川中.细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群冻存配方：向培养液中加入DMSO或廿油，封与安瓶，存于温度达-196'C液氮中长期储存连续细胞系：获得持久性增殖能力的细胞群体。细胞获得永中性或称为恶性性，而获得不死性的细胞核型大多变成异倍体，接触抑制消失“一代”桁细胞接种到分离再培养的所用的时间。与细胞倍增一代不是一个含义。在细胞一代中，细胞能倍增3〜6次，经历三个阶段：潜伏期：接种——经过——悬浮期（细胞质回缩，胞体呈球形）——贴璧初代培养细胞经过10〜24h或更多连续细胞系

5、和癌细胞系经过10〜30min指数増生期：细胞增殖最旺盛，细胞分裂相增多。是细胞-•代中活力最好的吋期，是进行各种实验玷好和域主要的阶段。持续3-5天。停滞期/平顶期：细胞景和密度达到饱和，细胞停滞增殖。表明细胞进入到停滞期，细胞数量持〒。特点：细胞不增殖，有代谢活动。培养液中的营养已逐渐耗尽，代谢产物积累增多，pH降低，此时需耍传代，否则细胞将会中毐，发生形态改变，细胞会从底物脱落死亡。细胞分裂指数（MitoticIndex，MI）:细胞群中每1000个细胞中的分裂相数。条件：分裂相数与细胞种类、培养成分、p

6、H培养箱温度有关。接触抑制：细胞相丸接触抑制细胞运动的现象。肿瘤细胞没有此现象培养细胞生存环境、条件和代谢：一、无污染环境二、温度：37°C耐低温不耐高温三、气体环境和pH:95%氧气+5%二氧化碳pH7.2〜7.4耐酸不耐碱HEPES：防止pH迅速变动，维持pH恒定四、培养细胞牛存所需基本物质1、糖2、氨基酸3、各种维生素4、促生长因子*:血清*5、其他物质五、渗透压谷胺酰胺的作用：4促进各种氨基酸进入细胞膜。所含的氨是核酸屮嘌呤和嘧啶的来源；是合成3,2和一磷酸腺苷时所需物；是能源和碳的来源。谷胺酰胺在溶液

7、中不稳定，应放置存:一20r冰箱保存，川前加入培养液内。已含有谷胺酰胺的培养液在1T冰箱内可放SfflO吋重新加入原来景的谷胺酰胺。增加难培养细胞成功率的物质：促生长因了：培养液除营养成分外，也需要激索类物质起到促进细胞增范生氏作用。胰岛素(1〜10单位)促进细胞利用葡萄糖和氨基酸；氢化可的松(10-8〜I0-7M)促进表皮上皮细胞和乳腺上皮细胞增殖牛.长的作用，提高祌经胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率；它物质：在细胞生长过程屮，需要钾、钠、钙、镁鉍和磷以外，还需要微聚元素，如铁、锌、硒铜、锰、铝钒等。培养基种

8、类分为半固体和液体两类。液体培养难又可分为合成、天然和无血清培养基血清的主要作用•提供细胞生存、生长和增殖所必需的生长调节因子。•补充培养液屮没柯或量不足的营养成分。•含有生长基质成分使细胞易贴附在培养器皿上。•提供载体蛋白，可结合维生素、脂质、金属离子等。•有中和毒性物质保护细胞不受伤害。•提供缶G酶抑制剂，保护细胞不受死细胞释放的蛋G酶的损害。饲细胞(Feedercells)：也称