四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中ck8表达研究

《四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中ck8表达研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、四氯化碳诱导的肝纤维化大歐肝脏中CK8表达研宄李晋1(通讯作者)徐尚福2白国辉1罗果1朱姜1(1遵义医学院医学与生物学研究中心563000)(2遵义医学院药理学教研室/基础药理省部共建教育部重点实验室563000)【摘要】目的观察四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏细胞角蛋白8(Cytokerantin-8,CK8｝表达的变化。方法雄性SD大鼠20只，随机分为空白对照组和肝纤维化组，肝纤维化组釆用10%四氯化碳lml/kg，2次/每周，共12周诱导大鼠肝纤维化模型，空白对照组给予等量生理盐水。第12周末收集大鼠的外周血和肝脏；外周血离心获得血清后检测肝功能指标ALT、AST；石蜡

2、切片的HE染色观察大鼠肝脏的病理学改变；RealtimeRT-PCR检测肝纤维化大鼠肝脏组织中CK8的mRNA表达。结果四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠的外周血肝功能生化检测ALT和AST较空白对照组显著升高(P<0.05)；肝纤维化组大鼠肝脏HE染色可见明显纤维化改变；四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏组织中CK8mRNA的表达较空白对照组明显升高(P<0.05)。结论CK8在四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中的表达升高。【关键词】肝纤维化细胞角蛋白8大鼠【中图分类号】R3【文献标识码】A【文章编号】2095-1752(2014)20-0144-02细胞角蛋白8乂称角蛋白

3、8(keratin-8,K8),表达于单层、复层和假复层上皮，属碱性角蛋白(II型角蛋白)。在正常肝脏中CK8与CK18以“肝细胞型”角蛋白成对表达。研究表明，CK8与多种肝脏疾病有关，如CK8在四氯化碳诱导的急性小鼠肝损伤时高表达［1］，但作者尚未见有关化学诱导肝纤维化形成后对细胞角蛋白CK8表达影响的报道。因此，木实验研宄四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏中CK8的表达，为肝纤维化的机制研究提供数据积累。1材料1.1试剂与药品ALT和AST检测试剂盒购自南京建成生物技术有限公司（批号20120814）；四氯化碳购自阿拉丁化学试剂冇限公司（批号20110513），橄榄油购自国

4、药集团化学试剂有限公司（批号20120125），PCR试剂盒与引物购自TaKaRa公司（批号BK5906）。1.2主要仪器RealtimeRT-PCR仪型号CFX-connect购自美国BIO-RAD公司，全自动生化仪型号AU-5421购自美同BeckmanCoulter公司，显微镜型号DM4000B购自德国Leica公司。1.3实验动物SD大鼠20只，雄性，体重200±20g，SPF级，购自第三军医大学大坪医院实验动物中心，合格证号：SCXK（渝）2012-0005。2方法2.1动物分组及模型诱导大鼠随机分为两组，正常对照组（control,10只）和肝纤维

5、化组（hepaticfibrosis，10只），肝纤维化组大鼠每周2次给予10%四氯化碳lm/kg皮下注射，空白对照组给予等量生理盐水，共12周，收集大鼠外周血和肝组织备用。2.2肝功能检测按说明书采用谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）测定试剂盒测定血清中的ALT、AST含量。2.3肝脏病理学检测相同部位肝脏组织常规石蜡包埋切片。苏木素染色，伊红染色（H.E.），显微镜观察。2.4肝脏总RNA提取50mg肝脏于ImIRNAisoPlus液中匀浆，200μl三氯甲烷萃取后取上清液，加等量异丙醇沉淀。所得RNA用现配75%乙醇洗涤后，50μlDEPC处理后的

6、水稀释。总RNA采用紫外分光光度计法检测RNA浓度及质量，以A260/A280的比值在1.8-2.0之间认为所提RNA质量良好，并统一RNA浓度备用。2.5RealtimeRT-PCR检测大鼠肝脏CK8mRNA的表达总RNA采用RT-PCR两部法进行扩增0的片段。采用逆转录试剂盒将总RNA逆转录成cDNA，然后采用SYBRGreen法进行RealtimeRT-PCR,CK8的特异性引物有宝生物（大连）冇限公司设计合成。引物序歹！J（5-3排列）如下，CK8上游:acgagateaacttcctccgg,下游：atctcctcatactgggcacg；β-actin

7、上i游：ggagattactgccctggctccta,下访字：gactcatcgtactcctgcttgctg。结果采用相对定量法进行分析［2］。2.6数据统计所有数据以x-&plUSmn;S表示，组间比较采用独立样本t检验，以P<0.05认为具有统计学差异。3结果3.1大鼠肝功能与肝脏形态学结果正常大鼠肝脏形态正常，肝小叶结构完整，排列有序。四氯化碳诱导的肝纤维化模型组多数肝细胞发生脂肪变性，肝小叶失去正常结构，胶原纤维增生，并形成假小叶，另可见汇管区及中央静脉周围人量炎性细胞侵润。肝功能结果显示ALT和