Rh(D)血型鉴定标准操作程序

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1、月亮县中医院项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10页码：第-4-页，共4页检验科血库日常操作SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101SOP_10-2Rh(D)血型鉴定标准操作程序一、目的：确保输血安全，严格检验质量标准，为临床提供及时、可靠的结果报告。二、适用范围：血型鉴定。三、操作人员：检验科授权工作人员四、操作步骤：1.原理：1.1Rh血型系统：Rh血型是一个极为复杂的血型系统，其重要性仅次于ABO血型系统。ISBT现已确定Rh血型系统中共有46个血型抗原。其中主要的抗原D、C、c、E、e分别表示为RH1、

2、RH2、RH3、RH4、RH5或004001、04002、004003、004004、004005。其抗原中包括了五个抗原之间的复合体以及弱表达等等，但在临床中主要的问题大都出自这五个抗原:抗E、抗e、抗C、抗c、抗D。用这五种抗血清检查红细胞抗原可以有18种表现型，在临床输血中一般只做D抗原的鉴定。1.2D抗原：含有D（正常D抗原）；弱D（weakD）；不完全D（partialD）；不完全弱D；增强性D（elevatedD）；正常D抗原。由于红细胞上的D抗原较少，弱D抗原不能与盐水抗体（IgM）凝集，只能通过与不完全抗体的结合用抗球蛋白

3、试验检出Del。一些非常弱的D型抗原，只能被吸收放散试验（如三氯乙烯和三氯甲烷放散法）检测出来。1.3Rh抗体：Rh血型的免疫原性强度可能仅次于ABO血型，其中以D抗原最强，其次为E、c、C、e。绝大部分Rh抗体为免疫抗体，但少部分可能为自然发生的抗体。2试剂：（1）抗D试剂，包括完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体及改性IgG抗体等低蛋白试剂；（2）Rh对照试剂（通常可用自身血清或抗A、B管代替）；（3）Rh阳性和阴性5%红细胞悬液；（4）待检2~5%红细胞悬液。3方法：3.1样本采集：真空抽血2ml至一次性抗凝管（EDTA－K2干粉）中，

4、混匀后备用。3.2操作：3.2.1玻片法：使用完全抗体性质的单克隆或多克隆抗体等低蛋白试剂。不适合于输血前献血者和病人的血型鉴定，仅适合于临床体检时的RH血型鉴定。3.2.2试管法：①取4支小试管，分别标记被检者、阴阳性对照、试剂对照（自身对照）；②前3管中加入IgM抗D试剂各一滴，试剂对照管加对照试剂一滴；③往各管中加入相应3%红细胞，试剂对照管中加入待检者红细胞；④轻摇试管，使其混匀，3000r/min离心1min；编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：20180101月亮县中医院

5、项目文件编号：YCXZYYJYK_SOP_10页码：第-4-页，共4页检验科血库日常操作SOP手册版本：第3版，第1次修订生效日期：20180101⑤轻摇重悬离心沉淀红细胞，观察凝集结果。结果判断：阳性对照管凝集，阴性对照管和试剂对照管不凝集，受检者管凝集为阳性，受检管不凝集为阴性。附注：①红细胞浓度以3%RBC等渗盐水悬液为宜。②试验最适宜温度为20-37℃，试剂贮存温度2-8℃。③本试验仅作体外检测用。④待检管为阴性或可疑（<1+），需用改良低离子聚凝胺法做弱D检测。3.2.3酶法：（1）原理：不完全抗体不能与相应抗原红细胞盐水悬液凝

6、集，但用蛋白酶消化红细胞后则可与不完全抗体凝集。可用的蛋白酶有胰酶、木瓜酶、无花果酶、菠萝酶等，常用木瓜酶，其敏感性强，不易出现非特异性凝集。（2）试剂和材料：①抗D血清；②1%木瓜酶溶液：称取1g木瓜酶溶于100mlpH5.5磷酸盐缓冲液中；③2~5%Rh阴阳性红细胞；④待检红细胞悬液。（3）操作方法：①取3支小试管分别标记；②往试管中加入抗D血清、木瓜酶及相应红细胞悬液各1滴；③置37℃水浴20~30分钟，取出轻轻摇动试管观察凝集反应。结果判断：阳性对照管凝集，阴性对照管不凝集，则受检者凝集为阳性，受检者不凝集为阴性。（4）假阳性反应

7、：①搞错分型抗血清：为防止此情况发生，国外用不同颜色的标签以区别不同的Rh抗血清，如抗D为灰色、抗C为粉红色、抗E为棕色、抗c为淡紫色、抗e为绿色。②试剂中存在具有其他特异性的抗体：为此对疑难抗原定型时，建议用不同来源的抗血清同时做两份试验。因为使用两份标明特异性祖同的抗血清得到不一致的结果时，就会使检验人员想到有进一步试验的必要。③多凝集红细胞与任何人血清会发生凝集。④当用未经洗涤的细胞作试验时，试样中自身凝集和异常蛋白质可引起假阳性结果。⑤试剂瓶可能被细菌、外来物或其他抗血清所污染。（5）假阴性反应：①搞错抗血清：每次试验时应细心核对

8、抗血清瓶子上的标签。②试管中漏加抗血清，所以在加入细胞悬液之前，必须检查试管中有无血清。编写者：张三三审核者：李四四批准者：李四四时间：20180101时间：20180101时间：201801