深部感染真菌种类鉴别的微生物检验

《深部感染真菌种类鉴别的微生物检验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、深部感染真菌种类鉴别的微生物检验杨风云（黑龙江省哈尔滨木兰县疾病预防控制中心151900）【中图分类号】R37【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）13-0156-021白色酵母菌白色假丝酵母菌通常存在于人的口腔、上呼吸道、肠道和阴道黏膜上，当机体发牛.正常菌群失调或抵抗力降低时，可引起各种念珠菌病。1.1生物学特性白色假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3〜6μm。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝，在玉米粉培养基中可产牛.假菌丝和厚膜孢子。1.2微生物检验（1）标木直接检验1＞直接镜检取脓汁、痰和局部炎性分泌物直接涂片，革兰染色后镜检

2、。显微镜下见到革兰阳性、圆形（或卵圆形）菌体或孢子及假菌丝，即可确认假丝酵母菌感染。2＞抗原检测取病人血清做EUSA、免疫印迹等法检测白色假丝酵母菌抗原。3＞核酸检测用PCR法将假丝酵母菌DNA分子扩增后以分子探针检测，只有较好的敏感性和特异性。（2）分离培养与鉴定1＞普通培养将标木接种于沙氐培养基上25°C或37°C培养1〜4天后，培养基表面可出现奶油色类酵母型菌落。镜检可见假菌丝和芽生孢子。2＞芽管形成试验将假丝酵母菌接种于0.2〜0.5ml人或动物血清中，37°C孵育1.5〜4h,镜检观察有无芽管形成。白色假丝酵母菌可形成芽管，但并非所有假丝酵母菌都形成芽管，其他假丝酵母菌一般不形

3、成芽管。试验时应设置阴性对照（热带假丝酵母菌）和阳性对照（白色假丝酵母菌）。3)糖同化或发酵试验假丝酵母菌，凡能发酵某种糖，一定能冋化该种糖，故只需做那些不被发酵糖的同化试验。将培养物接种于糖发酵管，25°C孵育，一般观察2〜3天，对不发酵管或弱发酵管可延长至10天或2〜4周。同化试验所有的基础培养基含有(NH4)2SO4、KH2PO4、MgSO4?7H2O、CaCI2?2H2O、NaCI和酵母浸膏，试验时分别加入各种糖。同吋以葡萄糖和基础培养基作对照。观察结果时要观察冇无酵母生长或液体培养基是否变混浊。2热带假丝酵母茵热带假丝酵母菌广泛分布于自然界，在人体表和外界相同的腔道中也存在，它

4、可引起皮肤、黏膜和内脏假丝酵母菌病，而且苏产生的毒素可引起过敏反应及组织损伤。2.1生物学特性热带假丝酵母菌呈圆形或卵圆形，直径3〜6μm。革兰阳性，着色不均匀。出芽方式繁殖，在组织内可见芽生孢子、假菌丝。2.2微生物检验(1)标本直接检验1｝直接镜检将标本作涂片革兰染色后镜检，观察革兰阳性的假丝酵母菌。2)分离培养于鉴定将标本接种于沙氏培养基上形成色暗而干燥的菌落，取菌落作TZC反应。TZC反应即在葡萄糖蛋白胨琼脂内加入0.05g/L氯化三苯四氮唑(TZC)，热带假丝酵母菌在此培养基上生长后使培养基变为深红色或紫色，而白色假丝酵母菌没有此现象，K他假丝酵母菌使培养基变为红色。芽管

5、形成较迟(血清中6h以上)，不形成厚膜孢子、动物试验阴性。3隐球菌隐球菌属包括17个种和7个变种，其中仅新型隐球菌及其变种奋致病性，新型隐球菌广泛分布于自然界，也可存在于人体体表、U腔和肠道中。本菌属外源性感染，经呼吸道侵入人体，由肺经血行播散吋可侵犯所冇脏器组织，主要侵犯肺、脑及脑膜，也可侵犯皮肤、骨和关节。新型隐球菌病好发于细胞免疫功能低下者，如AIDS、恶性肿瘤、糖尿病、器官移植及大剂量使用糖皮质激素者。3.1生物学特性新型隐球菌在组织中呈圆形或卵圆形，直径一般在4〜6μm，外周有宽厚荚膜，荚膜较菌体大1〜3倍，折光性强，一般染色法不易着色而难以发现而得名。新型隐球菌有明显的

6、生物学多态性，有A、B、C、D四个血清型，在沙氏培养基上形成白色至奶汕色粘稠菌落。3.2微生物检验(1)标本直接检验1｝直接镜检用病人脑脊液作墨汁负染色检查，在黑色背景下可镜检到透亮菌体和宽厚荚膜。非致病性隐球菌无荚膜。2)抗原检测用乳胶凝集试验、ELISA,和单克隆抗体法等免疫学法检测隐球菌荚膜多糖特异性抗原。3＞核酸检测临床可用脑脊液、支气管吸出物等，以DNA探针法检测，所用探针和引物选自其保守区的重复序列，具有高度特异性。(2)分离培养与鉴定1＞分离培养将标本接种于沙氏培养基上，病原性隐球菌在25°C和37°C孵育均可生长，而非病原性隐球菌在37°C吋不生长。培养2〜5天后观察菌落

7、形态特点。2＞鉴定①酚氧化酶试验：将菌落接种于L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，经2〜5天培养，新型隐球菌呈棕黑色菌落。用己知新型隐球菌和浅白隐球菌分别作阳性和阴性对照。②脲酶试验：新型隐球菌能产生脲酶，可分解尿素琼脂培养基的尿素形成NH4和C02,使培养基pH值升高，使培养基由黄色变为粉红色。③糖冋化及发酵试验：新型隐球菌能同化葡萄糖、半乳糖、蔗糖和肌醇，但不能发酵糖类，不能同化硝酸盐。非致病隐球菌不能同化肌醇。参考文献[1】吴绍