脱细胞真皮基质(adm)制备前后的变化

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1、脱细胞真皮基质(ADM)制备前后的变化：霍孟华戚可名黄金井庄强管正玉王阳王法刚【摘要】目的探讨脱细胞真皮基质制备前后出现的各种变化。方法将人全厚皮切制成厚0.5mm的中厚皮片，先后经1MNaCl溶液、0.1％戊二醛、0.5％SDS、0.25％胰蛋白酶、冷冻干燥及水化处理，制得脱细胞真皮基质（ADM）。观察制备前后出现的各种变化。结果皮片经处理后，ADM具有良好的弹性和柔韧性。皮片中所有细胞成分消失，胶原及弹力纤维结构完整、排列规则，基底膜存在。处理前后弹力/胶原纤维面密度分别为0.25±0.08和0.26±0.

2、08、胶原含量分别为69.18±12.51和85.17±28.93、Ⅲ/Ⅰ型胶原比值分别为0.85±0.22和0.71±0.14，均无明显变化。结论脱细胞真皮基质制备过程可有效去除皮肤中的细胞成分，完整保留真皮基质和基底膜，形成相对无免疫活性的脱细胞真皮基质。【关键词】脱细胞真皮基质制备Studiesonthechangesduringpreparationofacellulardermalmatrix(ADM)【Abstract】ObjectiveToinvestigatethechangesduringpr

3、eparationofADM.MethodsSplit-thicknessallograft，0.5mmthick，fullthicknesshuman’sskinsatome.Donorskinsalmatricesalmatrices(ADM).Thedynamicchangesduringprocessingovedandbasementmembraneeovedallthecellularponentsfromthedonorskins，retaineddermalmatrixandbasementme

4、mbrane，andacquiredacellulardermalmatrixthatexhibitednoimmunopetence.【Keyalmatrixpreparation脱细胞真皮基质(acellulardermalmatrix，ADM)是一种良好的基质，可作为真皮替代品与自体表皮复合移植，亦可作为软组织填充材料单独使用，临床上应用愈来愈广泛。最早由Liversey研制成功，并申请了美国专利［1］；国内报道的制备方法差别较大，对此我们进行了研究，移植后亦获得了成功。现就其制备过程中出现的各种变化报道

5、如下。1材料与方法1.1异体皮肤异体皮肤于我院整形手术患者，术前查体正常，免疫学检查HBsAg、HCV、HIV、TP-Anti均为阴性。切下的健康皮肤制成厚约0.5mm的中厚皮片。1.2实验条件整个实验过程均需在严格无菌条件下进行。1.3实验步骤中厚皮片入1MNaCl溶液，37℃，浸泡24h→0.1%戍二醛缓冲液，37℃，浸泡5min→0.5%SDS溶液，37℃，浸泡2h→0.25%胰蛋白酶溶液，消化20min→大量的PBS溶液反复多次漂洗，至漂洗液无泡沫为止→冷冻干燥机，-60℃，ATM56，持续12h→密封

6、保存。1.4ADM的水化室温下冷冻干燥的ADM置于PBS溶液中浸泡30min以上，即可使用。2结果2.1大体观察皮片经高渗盐水处理后，表皮易于从真皮上呈片状完整剥离，有时在表皮和真皮之间形成水泡样间隙，毛发与表皮亦一起脱落。真皮呈瓷白色，富有弹性，形成基底膜和真皮两个面，其中基底膜面有光泽，比真皮面光滑（图1～4）。戍二醛缓冲液、SDS、胰蛋白酶处理前后，外观无显著变化。冷冻干燥处理后真皮变干、变硬，弹性明显减退，状如瓷白色皮革样。水化处理后，与处理前的皮片相比，手感较酥软，弹性略有减退，厚度稍有增加。2.2细

7、菌学检查将ADM粉碎后进行细菌培养，未见细菌生长。图1人体正常皮肤，处理前图21MNaCl处理后，表皮被掀起图31MNaCl处理后，去除的表皮图41MNaCl处理后的皮肤2.3组织学观察HE染色显示皮片经高渗盐水处理后，表皮细胞各层均被完全去除，基底膜完整，形成一个连续的光滑面，真皮中的细胞成分仍然存在；经戍二醛缓冲液、SDS、胰蛋白酶处理后，真皮中所有的细胞成分即被完全去除，完整地保留了基质成分，即脱细胞真皮基质（图5～7）。图8图9图8人体正常皮肤，真皮内丰富的弹力纤维，Verhoeff×100　　图9脱细

8、胞真皮基质，丰富的弹力纤维，Verhoeff×100Verhoeff铁苏木素染色证实ADM中的胶原、弹力纤维形态规则、结构清晰、无肿胀，无变性坏死，排列整齐，整个处理过程对其无显著影响（图8～9）。2.4Verhoeff铁苏木素染色计算机图像分析结果相同厚度（5μm）的组织切片，经Verhoeff铁苏木素染色，显示红色的胶原纤维和黑色的弹力纤维，于普通显微镜下观察其形态，并行计算机图像