磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立

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1、磷酸甘油酸变位酶活性测定方法建立【关键词】磷酸甘油酸变位酶心肌梗脑出血动力学法Abstract：ObjectiveToestablishamethodapplicabletoassayPGAMinanautomaticbiochemicalanalyzerdynamicsandtoevaluatethereliabilityofthismethod.TofurtherexploretheearlyrolethathumanserumPGAMactivityplaysinacutemyocardialinfarctionandcerebralhemorrhage,andotherdisease

2、sandasaresultfindoutadesirablemethod.MethodsTheactivityinedby3-phosphoglycerateassubstrate,theenolaseandaseriesofcouplingto340nmaticanalyzerinthedeterminationoftotalactivitycouldbederived.ResultsThroughaseriesofparametersdetermination,agoodautomaticbiochemicalanalyzertothePGAMassayatic-couplingmeth

3、odhastheadvantageofsimplicity,fast-determination,goodstability,highaccuracyandsensitivity,andstronganti-interference,availabilitytotheautomaticbiochemicalanalyzer.Keyyocardialinfarction;cerebralhemorrhage;kiic磷酸甘油酸变位酶(Phosphoglycericacidmutase，PGAM)广泛分布人体全身各组织器官，主要定位于细胞溶胶中。PGAM酶是糖代谢与分解酶系之一，所催化的反应是糖

4、分解代谢中间环节，现知PGAM是不同基因指导合成的M和B亚基组成的二聚体。聚合成MM、BB、MB三型，MM主要存在于骨骼肌和心肌;BB型主要存在于脑、肝、肾和红细胞;MB型主要存在于心肌。MM、BB、MB分子量为60000。所以建立一套能适用于生化自动分析仪，并能在临床上应用的动力学测定PGAM活性方法，对于临床实验诊断学有重要意义［1］。1材料与方法1.1试剂与仪器1.1.1R1：三乙醇胺-盐酸缓冲液(pH7.6，84mmol／L)，1mmol／LMgSO4，0.24mmol／LNADH，0.71mmol／LADP，0.12mmol／L2，3-二磷酸甘油酸，9.3ku／L乳酸脱氢酶，1.4

5、ku／L丙酮酸激酶，1.4ku／L烯醇化酶［2］。R2：三乙醇胺-盐酸缓冲液(pH7.6，84mmol/L)4.8mmol／L3-磷酸甘油酸盐。1.1.2仪器贝克曼SYNCHRON-LX20全自动生化分析仪［2］121-123。1.2实验对象对照组为锦州市中心血站健康体检者，男50名，女50名；疾病组脑出血患者54名，急性心肌梗死患者。1.3实验方法1.3.1测定原理3-PGAPGAM2-PGA烯醇化酶磷酸烯醇式丙酮酸PKADPATP+丙酮酸LDNADH乳酸+NAD+因为NADH在340nm处有强吸收峰，吸光度下降速率与待测样品中PGAM成正比关系，监测340nm吸光度下降△A/min，求得

6、酶活性［3］。1.3.2精密度试验活性高中低3份活性分别为74、37、8.5U/L不同的PGAM新鲜混合血清，短时间各测定10次分别计算批内、s及CV；连续5日，将高中低活性PGAM新鲜混合血清标本插入常规标本中测定，计算批间、s及CV［4］。1.3.3PGAM线性范围取PGAM混合血清，稀释成不同浓度，使样本含量依次为1/10、1/5、2/5、3/5、4/5、5/5进行测定。1.3.4回收率试验和稀释实验为了证明方法的正确性，本实验依靠回收率试验和稀释试验证明。取PGAM为8.5U/L正常人血清和74U/L病人血清分别加10U/L和20U/L标准PGAM，测定与其理论值的差异。取PGAM活

7、性为30、88U/L的2种病人血清，分别稀释1～3倍，测定其与理论值的差异［5］。　　1.3.5稳定性试验将3例活性分别为12.3、39.6、63.5U/L血清在-20、4、25℃保存1反应方向(-)，动力学法测定，温度37℃，计算：因数法。2.2PGAM线性范围评价结果显示PGAM活性在0～140U/L范围内线性良好。结果见图1。2.3回收率试验平均回收率分别为97.9%和98.4%。稀释试验：实验结果证实