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时间:2018-11-12
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1、滋补肾阴方药对D【摘要】目的研究滋补肾阴方药对D-半乳糖(D-gal)所致衰老小鼠自由基代谢及免疫功能的影响。方法采用D-gal复制衰老小鼠模型。测定衰老小鼠血清中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,胸腺指数和脾指数,脾脏T淋巴细胞增殖活性及血清中白介素-2(IL-2)水平,并观察滋补肾阴方药对上述指标的影响。结果滋补肾阴方药能明显提高血清中SOD活性,降低血清中MDA含量,并提高胸腺指数、脾指数,脾脏T淋巴细胞增殖活性和血清中IL-2水平。结论抑制脂质过氧化反应,提高抗氧化酶活性.freeletabolis
2、mandimmunefunctionofagingmiceinducedbyD-gal.MethodsMalondialdehyde(MDA)contentandsuperoxidedismutase(SOD)activityinserum,thymusindexes,spleenindexes,activityofTlymphocyteandthelevelofIL-2inedinagingmiceinducedbyD-gal.Theeffectofinvigoratingkidney-YINrecipeontheabov
3、eindexes;decreaseMDAcontentinserum,enhancethymusindexes,.freelphocyteandserumIL-2content.ConclusionToinhibitlipidperoxidation,increaseactivityofantioxidaseandimproveimmunefunctionmightbeoneofthemechanismsofinvigoratingkidney-YINrecipeagainstaging.Keyedicine;Agingmo
4、del;Freeradicals;Immune自由基损伤和免疫功能低下是老化的重要机制之一。目前,中医延缓衰老研究以补肾占居绝对优势,温补肾阳延衰的研究已取得了一些进展[1],而滋补肾阴抗衰老的作用研究不多[2]。根据中医学阴阳互根,阴阳平衡的理论,补肾阴、补肾阳应该具有同等重要的作用。左归饮是中医滋补肾阴的代表名方,由熟地、山药、枸杞、炙甘草、茯苓和山茱萸组成,具有延缓衰老的功效[3],现已被用于临床治疗一些老年性疾病如冠心病、糖尿病等,效果较好。据此立滋补肾阴法作为延缓衰老治则,并观察经典方剂左归饮对D-半乳糖拟衰小鼠自
5、由基代谢及免疫功能有关指标的影响。现将结果报告如下。1材料和方法1.1材料1.1.1动物昆明种小鼠30只,2月龄,体重为(20±2.0)g,雌雄各半,由南京青龙山动物饲养厂提供,合格证号为SCXK(苏)2002-0018。1.1.2药品左归饮,由熟地、山药、枸杞、炙甘草、茯苓、山茱萸按9∶6∶6∶3∶4∶5比例组成。以上药物一次性购于安徽芜湖健康大药房,并经鉴定。上方常规水煎3次,合并滤液浓缩至生药含量0.5775g/ml,高压灭菌,4℃冷藏保存备用。1.1.3试剂与仪器D-半乳糖为上海试剂二厂产品。MDA、SOD测定试剂盒
6、为南京建成生物工程研究所产品。IL-2检测盒为晶美生物工程有限公司产品。刀豆蛋白A(ConA)、四甲基偶氮唑盐(MTT),华美生物工程公司出品。测定仪器为722分光光度计;550型酶联免疫检测仪。1.2方法1.2.1动物分组与给药昆明种小鼠30只,适应性喂养1周后随机分为3组,即正常对照组、模型对照组、滋补肾阴组,每组10只,雌雄各半。除正常对照组外,其余各组每只颈背皮下注射5%D-半乳糖0.5ml,1次/d,连用6周,造成衰老模型。正常对照组颈背皮下注射同等剂量生理盐水。造模的同时,正常对照组和模型对照组每只每天灌服生理盐
7、水0.5ml,滋补肾阴组按5.5g/(kg·d)剂量灌服左归饮煎液(相当于成人剂量的10倍)。1.2.2指标检测用药6周后,停药,禁食24h,称重。无菌取脾脏和胸腺,同时摘眼球取血2ml,3000r/min,离心5min,分离血清。小鼠血清中MDA含量、SOD活性和IL-2水平测定均严格按试剂盒说明书要求进行。丙二醛(MDA)测定:采用硫代巴比妥酸法测定血清中MDA含量。超氧化物歧化酶(SOD)测定:采用黄嘌呤氧化酶法测定血清中SOD活性。胸腺指数和脾脏指数测定:称重后计算,单位mg/g体重。胸腺指数(%)=胸腺重量小鼠重量
8、×100%脾脏指数(%)=脾脏重量小鼠重量×100%脾脏T淋巴细胞增殖活性测定:采用MTT法测定,将各组小鼠断头处死,无菌摘取脾脏。常规制备脾细胞悬液,用RPMI-1640完全营养液调浓度为5×106/ml。于96孔培养板上,每孔加入100μl脾细胞悬液,100μlConA溶液(终浓度4μ
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