溶血性贫血的实验室检查

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1、溶血性贫血的实验室检查方颖徐慧娟（江苏省溧阳市社渚镇周成卫生院213300）【关键词】溶血性贫血；实验室检查【中图分类号】R446【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2014）15-0167-021红细胞渗透脆性试验1.1原理红细胞渗透脆性试验是根据红细胞在低渗盐水溶液可逐渐胀大而破坏的原理来测定红细胞对不同浓度低渗盐水溶液的抵抗力。红细胞的表面积大而体积小者对低渗盐水抵抗力较大（脆性减低）；反之，则抵抗力较小（脆性增加）。1.2试剂10g/LNaCI溶液:取分析纯氯化钠事先于100°C下烘干，再置于干燥器中冷却

2、，准确称取l.OOg置100ml容量瓶中，加适量双蒸馏水溶解后，再加双蒸馏水至刻度［1］。1.3参考值开始溶血4.2〜4.6g八。完全溶血3.2〜3.4g/L。患者与正常对照，溶血管的NaCI浓度相差0.4g/L只有诊断价值。1.4注意事项NaCI必须干燥，称量精确，要用前新鲜配制溶液；木试验忌用抗凝血以免影响溶液的渗透压，如需要时可用肝素按10〜20IU/ml血液进行抗凝；血液与低渗盐水混匀时避免强烈振荡，以免机械性溶血，黄疸患者开始溶血管不易观察，严重贫血患者红细胞太少，皆可用等渗盐水将红细胞洗涤后再配成50%红细胞悬液

3、进行试验。2红细胞孵育渗透脆性试验2.1原理将血液置于37°C孵育24h,由于葡萄糖消耗，贮备的ATP减少，需要能量的红细胞膜对阳性离子的主动传递受阻，造成钠离子在红细胞内储积,细胞膨胀，孵育渗透脆性增加。有细胞膜缺陷及某些酶缺陷的红细胞能源限快耗尽，孵育渗透脆性明显增加。2.2试剂10g/L缓冲液(pH7.4):9gNaCI(AR)。1.365gNa2HPO4(AR)。0.184gNaH2P04(AR)o蒸馏水加至1000ml。此氯化钠磷酸盐缓冲液中氯化钠的浓度为9g/L,但其渗透压相当于10g/L氯化钠溶液［2］。2.3

4、操作取静脉血3ml,肝素抗凝后分为2份，1份立即试验，另1份在37°C温育24h再作试验；将10g/L氯化钠缓冲液按下表稀释成不同浓度；每管加肝素抗凝血0.05ml，轻轻颠倒混匀；放置室温(2CTC左右)30min后，将各管混匀1次，1500r/min离心5min,取上清，波长540nm以8.5g/L氯化钠磷酸盐缓冲液调零，以lg八NaCI完全溶血管的吸光度为完全溶血管A值，测定各溶血管上清液的吸光度并计算出相应的溶血度；红细胞中间脆性(MCF),以溶血度为纵坐标、不同浓度氯化钠浓度为横坐标作溶血曲线图，在曲线上，50%溶血

5、的氯化钠浓度为红细胞中间脆性。2.4注意事项血液孵育时所用的试剂及试管均应消毒，试管应加塞；试验中pH及温度必须恒定，加肝素抗凝血0.05ml的量必须准确；每次试验应作正常对照。3热溶血试验3.1原理热溶血试验是指患者的红细胞在其自身的血清(含补体)中，于37°C孵育后，由于葡萄糖分解产酸使血清酸化，从而导致有内在缺陷的红细胞溶解，产生溶血现象［3】。3.2操作以无菌干燥注射器取静脉血2ml，取下针头，缓缓地沿管壁注入消毒小试管中，加少许消毒石蜡汕覆盖，置37°C孵育箱保温24h，取出离心沉淀。结果判断：上清液颜色呈红色为阳

6、性。3.3参考值正常人为阴性。3.4注意事项操作过程要避免发生溶血。4蔗糖水溶血试验4.1原理蔗糖水溶血试验的原理是:蔗糖能通过C3前活化素系统激活补体经典途径，PNH(阵发性睡眠性血红蛋白尿症)患者红细胞对激活的补体敏感，故易发生溶血(若无蔗糖也可用葡萄糖代替)。4.2试剂92.4g/L蔗糖溶液。4.3操作取新鲜抗凝血（狗橼酸盐或草酸盐抗凝）0.5ml,加入4.5ml鹿糖溶液中，混匀，置37°C孵箱中30min后取出离心，上清液呈红色为阳性（溶血），上清液无色为阴性。5变性珠蛋白小体检查5.1原理变性珠蛋白小体（heinz

7、小体）是一种变性血红蛋白颗粒，一般附着在细胞膜上，故又称血红蛋白包涵体，当与某些碱性染料如耐尔蓝接触吋即被染成紫色或蓝黑色小点，可在显微镜下进行观察。5.2试剂5g/L耐尔蓝乙醇溶液。5.3操作置5g/L耐尔蓝乙醇液1滴于玻片一端，待干；取受检血液1滴,置于干燥的染料上，用另一玻片角轻轻搅匀；覆以盖玻片，静置5〜lOmin;油镜镜检，红细胞呈黄绿色，变性珠蛋白染成蓝黑色小点，根据颗粒人小及红细胞染色情况,可分为微粒型、粗粒型及空粒型（红细胞中Hb完全缺如，胞膜尚完整，边缘部有多个粗大或纤细不规则的颗粒），该小体系折光，圆形，

8、大小不等，数目不一及分布不匀的小体；计数500〜1000个红细胞，报告变性珠蛋白小体阳性红细胞的百分率［4】。参考文献［1】张云宁;苒国平;自身免疫性溶血性贫血的实验室检查与免疫分型［』］;中华实用诊断与治疗杂志;2009年12期［2】杨玉萍;马廉;溶血性贫血的实验室检查［儿中国小儿血液与